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鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

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1. 1 试验材料

坦布苏病毒JS804株和坦布苏病毒囊膜蛋白特异性单克隆抗体均由江苏省农业科学院兽医研究所禽病与生物兽药研究室保存提供;9日龄SPF鸭胚购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所;细胞膜蛋白提取试剂盒购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;Protein A+G琼脂糖、His标签抗体和碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG均购自上海碧云天生物技术有限公司。

1. 2 DEF细胞制备

取9日龄SPF鸭胚置于蛋托上,以75%酒精棉球擦拭蛋壳,随后在气室部位将蛋壳击碎,用无菌剪刀将卵膜剪开,取出鸭胚,去除鸭胚四肢、眼、喙、内脏及脑组织。以PBS洗涤鸭胚后放入小烧杯中剪碎,PBS洗涤剪碎的鸭胚,静置5 min,弃上清液;加入1.0 mL胰酶37 ℃消化10 min,再加入10.0 mL含5%胎牛血清的DMEM终止反应,用吸管吹打数次后进行细胞计数。计数后吸取上清液分装于细胞瓶中,每瓶约5×106个细胞。

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