关于CBLB502对造血干细胞辐射防护作用
作者简介：孙文沫（1989-），女，汉族，沈阳医学院，研究方向是实验血液学，E-mail：swm0901@163.com。汪亚伦（1962-），女，汉族，沈阳医学院，研究方向是生物化学与分子生物学， E-mail：wangyalun@sohu.com。
【摘 要】 目的：探讨CBLB502对造血干细胞辐射防护作用。方法：40只C57BL/6J小鼠随机分为照射对照组和CBLB502组，每组各20只。所有小鼠均接受X射线6.5Gy一次性照射，剂量率为67.2cGy/min。CBLB502组小鼠在照射前30分钟注射CBLB502，照射对照组予以腹腔注射等量生理盐水，对比两组骨髓有核细胞数和集落数。结果：照后24h，CBLB502组和照射对照组两组骨髓有核细胞数均减少，两组之间差异无统计学意义。照后24h，CBLB502组CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：CBLB502对造血干细胞有辐射防护作用。
【关键词】 CBLB502;造血干细胞;辐射
【中图分类号】R416
【文献标志码】A
【文章编号】1005-0019（2019）18-254-02
Toll样受体5（Toll-like receptor 5，TLR5）是在固有免疫系统中发挥重要效应的模式识别受体之一，可以特异识别病原体表面的分子，抵御机体外界病原微生物的入侵，是近年来免疫学研究的重点对象[1]。CBLB502是TLR5激动剂，是经过药理学改构的细菌鞭毛蛋白衍生物[2]。CBLB502具有较好的安全性和耐受性。本次研究使用X射线6.5Gy照射小鼠模型，探讨CBLB502对造血干细胞辐射防护作用，结果如下。
1 材料与方法
1.1 药物、仪器、试剂
CBLB502蛋白由pMD-18T-CBLB502质粒为模板，利用引物扩增全长序列，植入大肠杆菌，分离纯化合成;甲基纤维素培养基由加拿大 Stem Cell Technologies公司（重庆市华雅干细胞技术有限公司代理）生产，批号：04434;1640培养基由美国Gibco 公司生产;小鼠CD 45R/B220 抗体由美国BDB iosciences公司生产，批号：2347812;CD90.2抗体由加拿大eBioscience 公司生产，批号：E 07586-1631;液体1配比：1640培养基+2%胎牛血清+10U/ml肝素+100U /ml青链霉素;液体2配比：1640培养基+100U/ml青链霉素。
1.2 实验动物
C57BL/6J雄性小鼠40只（合格证号：SCXK（辽）2015-0001），体质量20-22g。小鼠饲养于沈阳医学院SPF级屏障动物房，每笼5只，自由饮水进食。
1.3 方法
将40只C57BL/6J小鼠随机分为照射对照组和CBLB502组，每组各20只。所有小鼠均接受X射线6.5Gy一次性照射，剂量率为67.2cGy/min。CBLB502组在照射前30分钟为小鼠注射CBLB502，0.2mg/kg，皮下给药，照射对照组予以腹腔注射等量生理盐水。在照射后24h，将小鼠处死，取20ml骨髓细胞悬液加入冰乙酸中，倒置显微镜下计数每只小鼠的骨髓有核细胞数。将制备单细胞悬液用甲基纤维素培养基调整骨髓有核细胞数到5*107/L，接种到培养板，在37℃、5%CO 培养箱中培养，4d后在倒置显微镜下计数骨髓有核细胞数和集落数，集落包括红系集落形成单位（CFU-E）、爆式红系集落形成单位（BFU-E）、粒单 系集落形成单位（CFU-GM）。
1.4 观察指标 对比两组骨髓有核细胞数和集落数。
1.5 统计学分析
采用SPSS20.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组方法对X射线6.5Gy射线照射小鼠照后造血的保护作用对比
照射24h后，CBLB502组和照射对照组两组骨髓有核细胞数均减少，两组之间差异无统计学意义。照后24h，CBLB502组CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。
3 讨论
固有免疫系统是机体抵抗外界侵袭的重要防线，是生物在长期进化过程中形成的免疫系统。模式识别受体是固有免疫系统的重要组成部分，在固有免疫应答中发挥着及其重要的作用。TLR5是模式识别受体，可以特异性识别病原微生物表面的模式分子，促进免疫效应细胞的分化和成熟，抵御病原微生物的侵袭[3]。TLR5可表达于树突状细胞、肠上皮细胞、单核细胞巨噬细胞表面，细菌鞭毛蛋白是其唯一的配体。CBLB502是细菌鞭毛蛋白经过优化后的重组蛋白，免疫原性较低。研究表明，CBLB502具有明显的辐射防护效果[4]。
本次研究中，照射24h后，CBLB502组和照射对照组两组骨髓有核细胞数均减少，两组之间差异无统计学意义。照后24h，CBLB502组CFU-E、BFU-E、CFU-GM多于照射對照组，差异具有统计学意义（P<0.05），提示CBLB502对照射后早期的骨髓有核细胞数减少无明显的作用，但是通过观察到CBLB502组集落数的增加，表明CBLB502对辐射后造血干细胞具有较明显的保护作用。CBLB502的辐射防护作用可能和细胞因子的表达调控和信号通路相关，其可能的作用机制为减少了骨髓造血干祖细胞凋亡和体内细胞因子表达增加，从而促进骨髓造血干细胞的更新和存活，发挥辐射防护作用。
综上所述，CBLB502对造血干细胞辐射防护作用，值得在临床中推广。
参考文献
[1] Lei W， Wen Z， Ge C H， et al. Toll‐likereceptor 5 signaling restrains T‐cell/natural killer T‐cell activation and protects against concanavalin A–induced hepatic injury[J]. Hepatology， 2017， 65（6）：2059-2073.
[2] Lopetuso L R， Jia R， Wang X M， et al. Epithelial-specific Toll-like Receptor （TLR）5 Activation Mediates Barrier Dysfunction in Experimental Ileitis.[J]. Inflammatory Bowel Diseases， 2017， 23（3）：392-403.
[3] Jager S D， Pijvelde G V， Anas A A， et al. 36Leukocyte TLR5 deficiency inhibits atherosclerosis by reduced macrophage recruitment and defective T cell responsiveness[J]. Scientific Reports， 2017， 7（103）：42688.
[4] 张源， 杨福军， 徐文清. 辐射防护药物研究最新进展[J]. 国际放射医学核医学杂志， 2017， 41（5）：353.