吴茱萸次碱对胰岛素抵抗骨骼肌细胞炎症因子表达的影响

计划项目（E-04010）

[通信作者] 聂绪强，副教授，主要研究方向为中药内分泌代谢药理，Tel： （0852）8609336，E-mail： niexuqiang@126.com

[作者简介] 杨建文，主任药师，E-mail：dc1055@163.com

胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）是多种疾病的“共同土壤”。 IR是代谢综合征（metabolic syndrome，MS）最核心的发病机制，它是糖尿病（diabetes mellitus，DM）、肥胖、心血管疾病（cardiovascular disease，CVD）以及动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）等多种代谢性疾病的共同病理生理基础。1993年，《Science》杂志的一篇文章首先引出了肿瘤坏死因子（TNF）和肥胖的关系，并引出了炎症和胰岛素抵抗的关系[1]。近年来大量研究显示[2-3]，炎症是导致 IR的重要因素之一。炎症学说也越来越受关注。炎症因子如IL-1，IL-6，TNF-α等可以通过血液和（或）旁分泌的作用影响胰岛素的敏感性和胰岛β细胞功能，进而引起IR。

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Evodia rutaecarpa （Juss.） Benth.、石虎E. rutaecarpa （Juss.） Benth. var. officinalis （Dode） Huang 或疏毛吴茱萸E. rutaecarpa （Juss.） Benth. var. bodinieri （Dode） Huang的干燥近成熟果实[4]。始载于《神农本经》，临床应用已有数百年历史。吴茱萸具有强心、扩张血管、镇痛、驱蛔虫等作用，可以用于治疗高血压、头痛、胃肠紊乱、腹泻、霍乱等疾病，同时对产后身体系统失调具有良好的恢复调节作用。其作用的物质基础是Rut等。Kobayash[5]报道Rut可以改善小鼠肥胖状态，另外Kim[6]研究发现Rut改善肥胖的机制可能与NPY（neuropeptides Y）和AgRP （agouti-related protein）有关。

笔者前期研究[7]发现Rut可以改善2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）大鼠高脂状态，降低血清炎症因子的表达，改善肝、肾、胰的病理状态，进而增加胰岛素的敏感性。骨骼肌是利用葡萄糖的主要外周组织，利用骨骼肌细胞体外研究胰岛素抵抗具有重要意义，而Rut对骨骼肌胰岛素抵抗情况及葡萄糖消耗是怎样的呢？其可能的机制是什么？国内外未见相关报道。因此，本实验先培养原代骨骼肌细胞，并将之诱导成胰岛素抵抗原代骨骼肌细胞（insulin resistant primary skeletal muscle cells，IR-PSMC），用Rut对IR-PSMC细胞进行干预，观察药物对IL-1，IL-6，TNF-α 等炎症因子的影响，进而探讨Rut对IR-PSMC细胞炎症影响是否具有直接作用及其改善胰岛素抵抗可能的机制。

1 材料

1.1 动物

3 d 龄SD大鼠，SPF级，雌雄不拘，5只，由上海B&K实验动物有限公司提供，许可证号SYXK （沪） 2008-0016，本实验用动物获得上海中医药大学动物伦理委员会同意。

1.2 仪器

TRUE-100纯水仪（上海菲特科学器材有限公司，序列号081230-62），CO₂细胞培养箱（HEPA CLASS 100，美国Thermo公司），倒置相差显微镜 （IX 71，Olympus，日本），HWS26型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司），SIM-F140AY65 SANYO制冰机（日本三洋），METTLER TOLEDO MS105型电子精密天平（梅特勒-拖利多仪器（上海）有限公司），Eppendorf 5811 R 低温高速离心机（Eppendorf Co.，编号0038606，德国），-80 ℃ 超低温冰箱（Forma-86C， 美国Thermo公司），200目、400目不锈钢筛网，外科剪，眼科镊等（上海青阳生物科技有限公司）。

1.3 试剂

Rut（纯度≥98%，上海同田生物制剂有限公司，上海），戊巴比妥钠（上海杰祥生物有限公司，上海），青霉素-链霉素（碧云天生物技术研究所，江苏），DMEM培养基（高糖，GIBCO），F-10 培养基（N6908，Sigma），胎牛血清，NaHCO₃，DMSO，NaOH，NaCl等（中国医药集团上海化学试剂公司，上海），葡萄糖氧化酶法-过氧化物酶法测定试剂盒（GOD-POD）（上海荣盛生物药业有限公司，上海），IL-1，IL-6，TNF-α ELISA 试剂盒（R&D，美国）。

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