探究三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果比较
【摘要】目的：研究分析三种金黄色葡萄球菌选择性分离培养基的检测效果。方法：分别使用Baird-Parker培养基（BP）、兔血浆纤维蛋白原培养基（RPF）和科玛嘉葡萄球菌显色培养基（CHROMagarTMStaph aureus）对标准菌株、食品分离株以及食品样品进行对比检测。结果：三种选择性培养基对金黄色葡萄球菌的回收率均达到95%以上；RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基的检测效率明显高于BP培养基；且两种培养基敏感性、特异性均优于传统的BP培养基。结论：应用RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基检测食品中金黄色葡萄球菌，较传统的BP培养基具有更好的检测效果，建议将RPF和CHROMagarTMStaph aureus培养基作为可靠的分离检测培养基应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。
【关键词】金黄色葡萄球菌；Baird-Parker培养基；检测效果
【中图分类号】R3781+1
【文献标志码】B
【文章编号】1005-0019（2018）09-238-01
金黃色葡萄球菌是引起人类食源性疾病的重要病原菌之一，对其的微生物检测方法目前仍以常规分离培养为主[1]。由于金黄色葡萄球菌是重要的食源性致病菌，而培养基的选择又是检验工作的关键，因此本研究采用标准菌株、食品分离株及各类食品样品，比较BP、RPF及CHROMagarTMStaph aureus三种培养基对金黄色葡萄球菌分离培养的检测效果进行初步评价。
1材料與方法
11材料
111菌株标准菌株：金黄色葡萄球菌ATCC6538及金黄色葡萄球菌ATCC25923；实验室保存菌株：食品中分离的金黄色葡萄球菌菌株40 株，非金黄色葡萄球菌菌株50株。
112培养基和试剂RPF培养基（货号：44003）、冻干兔血浆（货号：55181）由法国生物梅里埃公司提供；CHROMagarTMStaph aureus培养基（货号：CP60015 ）由郑州人福博赛生物技术有限责任公司提供；BP培养基（货号：CMD023）、胰胨大豆（TSA）培养基（货号：CMD027）、血琼脂培养基（货号：CMD002）、75%氯化钠肉汤（货号：CMA058）、牛肉汤（货号：CMA001）由上海市疾病预防控制中心提供。
113样品来源2017年1月—4月在大兴安岭地区食品超市、农贸市场采集的调理肉制品、熟肉制品、生牛奶等食品共计243份，经冷链送达实验室。
12方法选择性培养基目标菌株回收率、检测效率测试 回收率是选择性培养基分离效果的重要指标。选用金黄色葡萄球菌ATCC6538、ATCC25923菌株，经血琼脂培养基纯培养后挑取单个菌落转种（36±1）℃牛肉汤增菌过夜，将此增菌液用无菌生理盐水调成05麦氏浓度菌悬液，并10倍梯度稀释至10-8，选择10-5、10-6、10-7稀释度的菌悬液，每个稀释度分别吸取1 mL样品混匀液以03、03、04 mL接种量分别加入3块BP、RPF、CHROMagarTMStaph aureus、TSA培养基[8]，然后用无菌涂布棒涂布整个培养基，于36℃培养48 h后计数。各种选择性琼脂与TSA培养基的菌落数的比值，即为选择性培养基的回收率。同时观察菌株在18 h、24 h、48 h生长情况并记录。各培养基预期的典型菌落形态： RPF培养基呈黑色、灰色或白色，外围有沉淀晕环的菌落；CHROMagarTMStaph aureus培养基呈紫红色至粉红色菌落；BP培养基呈灰黑色至黑色，周围绕以不透明圈（沉淀）菌落。
2结果
21选择性培养基目标菌株的回收率金黄色葡萄球菌ATCC6538、ATCC25923菌株在BP 、RPF、CHROMagarTMStaph aureus培养基回收率：ATCC6538分别为985%、969%、1000%；ATCC25923分别为966%、1014%、1007%。三种选择性培养基的回收率差异無统计学意义（P>005）。
22选择性培养基目标菌株的检测效率2株金黄色葡萄球菌标准菌株在三种不同选择性培养基上生长情况分别为：在BP培养基上培养18～24 h时，菌落较小，黑色，无晕圈，生长没有呈现典型菌落特征或者特征表现不明显，培养至48 h后菌落呈现典型生长形态，黑色，有晕圈。
3讨论
在选择性增菌后使用分离培养基进行目标菌的分离鉴定是目前金黄色葡萄球菌检验的关键步骤之一。由于不同的分离培养基应用的原理不一样，检测方法的适用性、检测人员技术差异等因素，对各种分离培养基做好实验室质量控制和应用评估非常重要。
此次实验显示，RPF、CHROMagarTMStaph aureus培养基在测试菌株敏感性和特异性方面均优于BP培养基，但是没有一种选择型培养基的敏感性、特异性达到100%，在实验过程中仅仅采用单一的选择性培养基，不可避免会有漏检的风险。因此，采用多种选择性培养基是避免漏检现象发生的可行而有效的方法。建议将RPF、CHROMagarTMStaph aureus培养基作为一种可靠的检测技术应用于食品中金黄色葡萄球菌的分离检测。
参考文献
[1]食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验：GB 478910—2016[S].北京： 中国标准出版社，2017
[2]陈炯，顾其芳，刘诚，等.2011—2012年上海市食品中食源性致病菌的监测结果分析[J].上海预防医学，2014，26（4）：169-172
[3]赵贵明，刘沛，边凌淳，等.自制兔血浆纤维蛋白原琼脂培养基检测食品中金黄色葡萄球菌的效果观察[J].中国食品卫生杂志，2004，16（6）：501-503