吴茱萸不同炮制品中挥发油成分气相色谱—质谱分析

计划基础理论专项（2009CB522800）；北京中医药大学在读研究生项目（2015-JYB-XS094）

通讯作者：李飞，E-mail：lf668@sina.com

吴茱萸为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa （Juss.）Benth.、石虎 Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth. var. officinalis（Dode）Huang 或疏毛吴茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth. var. bodinieri（Dode）Huang的干燥近成熟果实，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻功效[1]。吴茱萸生品有小毒，挥发油类成分既是其有效成分又是毒性成分，炮制能降低吴茱萸挥发油的毒性[2-5]。吴茱萸炮制方法繁多，2015年版《中华人民共和国药典》中采用甘草炙法，各地炮制规范中记载有盐炙法、酒炙法、醋炙法、姜炙法以及黄连炙法等多种加辅料炙法。有研究比较吴茱萸炮制前后挥发性成分[6-8]，但结果不尽相同，且未比较酒炙、姜炙以及黄连炙后挥发油成分的变化。本研究采用气相色谱-质谱法（GC-MS）对吴茱萸生品、清水炙品及不同辅料炮制品中的挥发油成分进行分析，以期阐明不同炙法及辅料对于吴茱萸的挥发性成分的影响。

1 仪器与试药

TRACE MS气相色谱-质谱联用仪，美国Finnigan公司；PL2002电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；UT300B红外测温仪，电热套（KDM型），山东鄄城仪器厂。

吴茱萸（产地江西，批号20100131），购自安徽亳州药材批发公司，经北京中医药大学中药学院生药系张贵君教授鉴定为芸香科植物吴茱萸Euodia rutaecarpa（Juss.）Benth.的干燥近成熟果实；甘草（产地内蒙古，批号20100317），购自安国市神禾中药饮片有限责任公司，经北京中医药大学中药学院生药系陈玉婷教授鉴定为豆科植物乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎；黄连（产地重庆，批号20100618），购自北京同仁堂药业有限公司，经北京中医药大学生药系张贵君教授鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的干燥根茎；食盐（中盐北京盐业公司），米醋（北京龙门和田宽食品有限公司），黄酒（浙江绍兴县醇雕酒业有限公司），生姜（市售）。无水硫酸钠（分析纯，北京化学试剂三厂）。

2 方法与结果

2.1 样品的制备

2.1.1 生品 取吴茱萸，除去枝梗等杂质，得净吴茱萸。

2.1.2 清水炙品 净吴茱萸100 g中加入适量去离子水，拌匀，闷润至吸尽，置炒锅内，文火炒干，取出，摊开晾凉，得清水炙吴茱萸。（同时记录炒制温度和炒制时间，其他炮制品皆按此温度和时间进行炒制。）

2.1.3 各炮制品 参照2015年版《中华人民共和国药典》炙法制备甘草炙吴茱萸；制备盐水、姜汁（生姜压榨汁）、黄连汁、稀释米醋、稀释黄酒，分别按照清水炙品的炮制操作方法制备各炮制品，得盐炙吴茱萸、姜炙吴茱萸、黄连炙吴茱萸、醋炙吴茱萸、黄酒炙吴茱萸。

2.2 供试品溶液制备

参照2015年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅩD挥发油测定法甲法提取挥发油。称取吴茱萸及炮制品各50.00 g，置挥发油提取器中，加水500 mL，浸泡过夜，加热并保持微沸状态8 h，收集挥发油，用无水硫酸钠脱水，得黄色挥发油。各样品挥发油用乙醚稀释后，过0.22 μm滤膜，备用。生品、清水炙、甘草炙、盐炙、醋炙、姜炙、黄酒炙、黄连炙吴茱萸挥发油得率分别为0.71%、0.63%、0.51%、0.59%、0.59%、0.69%、0.63%、0.65%。

2.3 气相色谱-质谱条件

2.3.1 色谱条件 色谱柱为DB-5石英毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；进样量：1 μL；进样口温度240 ℃，传输线温度250 ℃；程序升温：40～220 ℃（3 ℃/min）；分流比：40∶1；载气为高纯氦气，流量1.0 μL/min。

2.3.2 质谱条件 EI离子源；电离能量70 eV；离子源温度：200 ℃；加速电压：200 eV；扫描范围：40～500 amu。

2.4 挥发油成分鉴定

吴茱萸生品含挥发油0.71%，经炮制后，挥发油含量均有所降低，不同炮制品中挥发油含量由高到低依次为：姜炙品>黄连炙品>黄酒炙品=清水炙品>醋炙品=盐炙品>甘草炙品。说明辅料会影响吴茱萸中挥发油的含量。

用GC-MS分析吴茱萸生品及各炮制品的挥发油，得其总离子流色谱图。通过检索质谱计算机数据系统（质谱数据库NIST.NBS），确认化合物；按峰面积归一化法计算各化合物在挥发油中的相对百分含量，结果见表1。生品中共检测出58个峰，鉴定出57个化合物；清水炙品中共检测出56个峰，鉴定出54个化合物；甘草炙品中共检测出53个峰，鉴定出52个化合物；盐炙品中共检测出51个峰，鉴定出49个化合物；醋炙品中共检测出56个峰，鉴定出52个化合物；黄酒炙品中共检测出57个峰，鉴定出53个化合物；姜炙品中共检测出57个峰，鉴定出53个化合物；黄连炙品中共检测出58个峰，鉴定出54个化合物。

3 讨论

与生品相比，吴茱萸各炮制品中含量下降明显或消失的成分大多集中在30～60 min。此区域内的成分有：乙酸金合欢酯、β-石竹烯、α-石竹烯、β-花柏烯、喇叭茶醇、α-桉叶烯、正十五烷、9，11（12）-荜澄茄二烯、橙花叔醇、4-甲基-正十五烷、对-斯巴醇、正十六烷、马兜铃烯、表蓝桉醇、邻苯二甲酸二异丁酯、棕榈酸等。由于挥发油是吴茱萸的主要毒性成分，炮制后吴茱萸的毒性降低，因此推测吴茱萸挥发油中的主要毒性成分以该部分为主。在此区域的挥发油中，有研究显示石竹烯给小鼠灌胃后有亚急性毒性[9-10]。

本试验中特引入了清水炙品，即炮制工艺流程与其他炙品相同，但炮制辅料为水。清水炙品的设置可对照性地阐释辅料在吴茱萸炮制中起到的作用。清水炙品与生品共有成分45个，吴茱萸清水炙后减少了13个成分，增加了12个成分，这些成分的变化主要与炮制过程有关，翻炒受热可能是引起变化的主要影响因素。盐炙品较清水炙品减少了8个成分，增加了3个成分，两者共有成分48个。醋炙品较清水炙品减少了6个成分，增加了6个成分，两者共有成分50个。黄酒炙品较清水炙品减少了9个成分，增加了10个成分，两者共有成分47个。姜炙品较清水炙品减少了10个成分，增加了11个成分，两者共有成分46个。黄连炙品较清水炙品减少了11个成分，增加了13个成分，两者共有成分45个。甘草炙品较清水炙品减少了19个成分，增加了16个成分，两者共有成分36个。参照韦氏等[11]建立的相似度计算方法，各炮制品中挥发油与生品的相似度从大到小依次为：清水炙品>盐炙品>醋炙品>黄酒炙品≈姜炙品>黄连炙品>甘草炙品。清水炙品与生品的相似度最高，各炮制品与生品的相似度均比清水炙品低，可见辅料会影响吴茱萸中挥发油成分的组成。生品及各炮制品中共有的成分共22个，生品有3个独有成分，甘草炙品中有5个独有成分，盐炙品中有1个独有成分，黄酒炙品中有2个独有成分，姜炙品中有3个独有成分，黄连炙品中有3个独有成分，清水炙品、醋炙品中无独有成分。不同的辅料对于吴茱萸中挥发油成分的影响不同，其中甘草产生的影响最为显著。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：171.

[2] 李红霞.吴茱萸汤在妇科临床的应用[J].中国中医药信息杂志，2009， 16（7）：83.

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[4] 杨伟鹏，王怡薇，王彦礼，等.吴茱萸汁炮制对黄连抗炎药效和苦寒药性的影响[J].中国中医药信息杂志，2013，20（8）：42-44，47.

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[6] 雷培海，周欣，汤洪波，等.GC-MS法测定吴茱萸炮制前后挥发性化学成分[J].分析测试学报，2005，24（6）：108-110.

[7] 王易宾，黄慕斌.吴茱萸炮制前后挥发油成分的研究[J].中药材， 1992，15（6）：18-20.

[8] 张韬，张世臣，魏璐雪.中药吴茱萸炮制前后挥发油成分分析[J].中国中药杂志，1994，19（6）：341-343.

[9] NAARALA J， KORPI A. Cell death and production of reactive oxygen species by murine macrophages after short term exposure to phthalates[J]. Toxicol Lett，2009，188（2）：157-160.

[10] 赵文红，厉曙光.DEHP染毒后小鼠各脏器含量的测定及其意义[J].中国卫生检验杂志，2005，15（3）：262-263，292.

[11] 韦建荣，马银海.Excel与中药指纹图谱相似度计算[J].昆明师范高等专科学校学报，2007，9（4）：110-112.

（收稿日期：2015-11-12）

（修回日期：2016-01-07；编辑：陈静）

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