大叶白麻总多酚提取工艺研究

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1.1 材料

大叶白麻叶采自格尔木市；焦性没食子酸标准品，上海抚生生物技术有限公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、丙酮、乙酸乙酯、七水硫酸亚铁、四水合酒石酸钾钠、无水乙醇均为分析纯。

SHZ-D（Ⅲ）型循环真空泵，郑州博科仪器设备有限公司；紫外-可见分光光度计，上海仪电分析仪器有限公司；MSE323S型电子天平，德国赛多利斯公司；FW177型中草药粉碎机，天津泰斯特仪器有限公司；DZKW型恒温水浴锅、101-1ES型干燥箱，北京市永光明医疗仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 样品预处理 将采摘的大叶白麻叶用清水洗净后阴干，均匀摊开后放入70 ℃的烘箱中烘烤4 h，取出后将烘干的大叶白麻叶放入中药高速粉碎机中粉碎，粉碎后过20目筛备用。

1.2.2 标准曲线绘制 参照贤景春等[12]、牛春燕等[13]的试验方法，以焦性没食子酸为标准品，采用可见分光光度法测定大叶白麻叶中多酚的含量。取0.25 mg/mL焦性没食子酸标准液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置于25 mL的容量瓶中，加去离子水5 mL，酒石酸铁溶液5 mL，用pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容；振荡混匀静置后，在波长为540 nm下测其吸光度。然后以标准液浓度为横坐标，以其吸光度为纵坐标，得标准曲线：A=0.101 26+15.744 2C，R2=0.999 2。

1.2.3 大叶白麻多酚的提取 称取一定质量的大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按比例加入设定浓度的溶剂，控制反应条件，水浴加热反应一定时间后，经循环多用真空泵抽滤，转移至50 mL的容量瓶中，用去离子水定容，待测。

准确量取定容后的多酚溶液1 mL于10 mL的容量瓶中，分别加入去离子水，酒石酸铁溶液1 mL，用pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液定容；振荡混匀静置后，在波长为540 nm下测其吸光度，然后根据标准曲线计算多酚的含量。

1.2.4 单因素试验

1）提取溶剂。准确称取4.0 g大叶白麻叶粉末，置于冷凝回流装置中，分别加入等体积的去离子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，水浴加热反应50 min后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。

2）乙醇体积分数。称取4.0 g大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比1∶10（g∶mL，下同）分别加入60%、70%、80%、90%的乙醇溶液，水浴加热反应50 min后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。

3）料液比。准确称取4.0 g大叶白麻叶粉末，置于冷凝回流装置中，分别按料液比1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25加入50%乙醇溶液，水浴加热反应50 min后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。

4）水浴温度。称取4.0 g大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比1∶10加入，50%乙醇溶液，分别在水浴温度30、40、50、60、70、80、85、90、95 ℃下反应50 min后，趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。

5）提取时间。称取4.0 g大叶白麻叶粉末，置于回流反应装置中，按料液比1∶10加入50%乙醇溶液在水浴温度80 ℃分别反应10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min，然后趁热抽滤，收集滤液，配制成一定浓度溶液，测定其吸光度。

1.2.5 正交试验设计 在单因素试验的基础上，选取提取温度（A）、乙醇体积分数（B）、水浴时间（C）、料液比（D）为主要考察因素，设计了4因素3水平正交试验，正交试验因素与水平见表1。

2 结果与分析

2.1 单因素试验结果

2.1.1 提取溶剂对大叶白麻多酚含量的影响 试验选取去离子水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等4种较为常用的溶剂对多酚进行提取，并对它们的提取效果进行比较（图1）。由图1可知，在4种溶剂中丙酮提取多酚含量较低，去离子水、乙醇和乙酸乙酯的提取含量较高，效果接近。但考虑到水提物杂质较多，后续较难处理，乙酸乙酯存在一定毒性，后续试验选取生活中常用的乙醇作为提取溶剂。

2.1.2 乙醇体积分数对大叶白麻多酚含量的影响 因多酚极性一般较大，选取体积分数较低的乙醇进行提取，并对30%、40%、50%、60%乙醇的提取情况进行考察（图2）。由图2可知，随着乙醇体积分数的增加，多酚的浸出量先增加后减少，当乙醇体积分数为50%时多酚的提取效果最好，故选择50%乙醇作为考察对象。

2.1.3 料液比对大叶白麻多酚含量的影响 由图3可知，随着溶剂的增加，多酚的浸出量先增加后减少，大叶白麻质量与乙醇溶剂体积之比为1∶20时，多酚的提取量达到最高。故后续试验中选择料液比为1∶20作为考察对象。

2.1.4 水浴温度对大叶白麻多酚含量的影响 由图4可知，随着提取温度的升高，大叶白麻多酚的含量呈上升趋势，当温度为80 ℃时，大叶白麻多酚的含量达到最高，其主要原因为高温提高了分子扩散速度，有利于多酚从细胞壁中溶出。当温度继续升高时含量开始下降，这可能是由于大叶白麻多酚热稳定性较差，易被氧化分解所致。故选择80 ℃的乙醇溶液作为考察对象。

2.1.5 提取时间对大叶白麻多酚含量的影响 由图5可知，随着提取时间的增加，多酚的浸出量先增加后减少，当水浴时间为25 min时，多酚的提取效果最好，所以选择水浴时间为25 min作为考察对象。

2.2 正交试验结果

参考单因素试验的结果，以料液比、提取时间、溶剂体积分数和提取温度等4个因素进行正交试验设计，优化乙醇提取大叶白麻多酚的最佳工艺。正交试验结果见表2。分析表2中的极差R值可知，4个因素影响顺序为B>C>D>A，即溶剂体积分数>水浴时间>料液比>水浴温度，最佳组合为A2B1C2D3。即最佳提取工艺条件为浸提温度80 ℃，溶剂体积分数40%，水浴时间30 min，料液比1∶20。为了验证正交试验结果，在此条件下进行了3次验证试验，多酚的平均提取率为10.21 mg/g，表明该方法可行。

3 小结

通过单因素试验，确定采用乙醇作为提取溶剂对大叶白麻多酚进行浸提，在进一步正交试验的基础上，确定了大叶白麻中多酚的最佳提取工艺条件： 浸提温度为80 ℃，乙醇体积分数为40%，水浴时间30 min，料液比为1∶20，该条件下大叶白麻多酚的含量可达10.21 mg/g。

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