江苏垦区小麦赤霉病菌对多菌灵的抗性监测及其替代杀菌剂的防病效果
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1.1材料
供试药剂：40%多菌灵悬浮剂（SC），苏州遍净植保科技有限公司生产；50%咪鲜胺可湿性粉剂（WP），江苏辉丰农化股份有限公司；43%戊唑醇悬浮剂（SC），盐城利民农化有限公司生产；25%氰烯菌酯悬浮剂（SC），江苏省农药研究所股份有限公司生产；25%丙硫菌唑可湿性粉剂（WP），南京惠宇农化有限公司加工；40%叶菌唑悬浮剂（SC），南京南农农药科技发展有限公司生产。
供试作物：小麦，多菌灵用量试验品种为‘华麦1号’；药剂筛选试验品种为‘淮麦22’，均由江苏大华种业集团有限公司提供。
1.2试验方法
1.2.1病菌抗药性菌株频率测定
白马湖农场常年稻麦轮作。2010-2016年，每年4月上旬（小麦拔节期）选择10块往年赤霉病严重的田块，每块田采集20个带有子囊壳的稻桩，去除泥土和根须，晒干后装入信封，寄至浙江大学马忠华教授处，委托其进行稻桩子囊壳分离菌多菌灵抗性监测；并于小麦灌浆期或成熟期，按不同监测目的，在自然发病区和两次喷施40%多菌灵悬浮剂有效成分750 g/hm2处理区随机采集赤霉病病穗，每个区域采集100个病穗，每个病穗分装于1个干净的纸质样品袋里，防止交叉感染，寄至南京农业大学周明国教授处，委托其进行病穗分离菌多菌灵抗性监测。
多菌灵抗性菌株的监测采用区分剂量法。以5.0 mg/L多菌灵作为鉴别剂量。将供试菌株在无药PSA平板上于25℃下培养3 d后，用打孔器在菌落边缘切取直径为5 mm的菌丝块，接种至含5.0 mg/L多菌灵的PSA平板上，于25℃下培养3 d，检查病菌的生长情况。菌丝能生长并能形成菌落的为抗性菌株。
抗药性倍数=药剂对抗药突变体菌株的EC50/药剂对原始菌株的EC50。
1.2.2田间药效试验
2015年4月25日（小麦扬花初期）在白马湖农场进行多菌灵用量试验，设40%多菌灵SC 750、937.5、1 125 g/hm2（均为有效剂量，下同）3个剂量处理和清水对照，共4个处理。分别于扬花初期和扬花盛期喷药，用水量450 L/hm2。每处理重复4次，小区面积30 m2，随机区组排列。分别于第二次喷药后15 d（小麦乳熟期）和30 d（小麦成熟期）调查病穗率、病情指数和防治效果。
2016年替代药剂筛选试验在垦区多个农场联合实施，按照《农药田间药效试验准则第15部分：杀菌剂防治小麦赤霉病NY/T1464.15-2007》的要求进行。各处理重复4次，小区面积30 m2，随机区组排列。分别于扬花初期和扬花盛期两次喷药，采用电动喷雾器进行喷雾，用水量450 L/hm2。第二次喷药后15 d（小麦乳熟期）调查病穗率、病情指数和防治效果，白马湖农场第二次施药后30 d（小麦成熟期）增加一次防效调查。成熟期每小区取200个麦穗，测定单穗产量。小麦籽粒扬净晒干后利用气相色谱法测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇DON含量。
赤霉病病情分级标准为0级：全穗发病；1级：病小穗占全穗的1/4以下；2级：病小穗占全穗的1/4～1/2；3级：病小穗占全穗的1/2以上～3/4；4级：病小穗占全穗的3/4以上。计算公式如下：
病情指数=100×Σ（病穗数×病级）/（调查总穗数×4）；
防治效果（%）=100×（对照病指或病穗率-处理病指或病穗率）/对照病指或病穗率。
1.3数据处理
试验数据在DPS 7.05软件中采用Duncan’s新复极差法进行差异显著性分析。
2结果与分析
2.1垦区多菌灵抗性赤霉病菌频率、抗性水平和致病能力
2010年以前已在垦区多个农场的小麦病穗中多次检测到抗多菌灵致病菌，抗性菌株频率一般在10%以下。2010年以后随赤霉病发生加重，抗性菌株比例迅速上升。白马湖农场2010年未防治的自然发病的病穗上分离的抗性菌株频率为7.61%，2011年11.70%，2012年16.20%，2015年56.88%，2016年达到66.25%（表1）。
兩次喷施40%多菌灵SC 750 g/hm2后，白马湖农场2015年抗性菌株比例接近98%，2016年分离菌株全部为抗性菌（表1）。结果表明多菌灵的使用可提高抗性菌株的比例。
2.2抗性菌株频率上升条件下多菌灵对小麦赤霉病的防治效果
2.2.1多菌灵的防病效果下降
多菌灵一直是垦区小麦生产中防治赤霉病的主要药剂，对赤霉病有较高且稳定的效果，防效一般在75%以上。2008年以前，感病品种扬花期两次喷洒40%多菌灵SC 750 g/hm2，防效一般在70%以上（表2），2010年、2012年的防效有下降趋势，2014年防效跌至10%以下，病穗率与不防治对照区十分接近，说明随着抗药性菌株频率的上升，多菌灵的防效下降。在抗性菌株频率达到50%左右，防治趋于失败。
2.2.2增加多菌灵用量不能显著提高防病效果
根据2015年5月20日调查，‘华麦4号’上40%多菌灵SC 750 g/ hm2处理的病穗率防效为29.94%，病指防效为30.44%，当多菌灵用量提高至1 125 g/hm2，病穗率防效为26.16%，病指防效为27.87%。尽管多菌灵用量增加了50%，但防治效果没有明显提高。小麦成熟期跟踪调查，40%多菌灵SC 750 g/hm2处理区的病穗率为75.53%，1 125 g/hm2处理区的病穗率为77.69%，对照区发病率87.56%，2个用量的防效基本一致。
2.3氰烯菌酯等新杀菌剂防治小麦赤霉病的效果
2.3.1不同杀菌剂防治赤霉病的效果
2016年多个农场联合试验发现，25%丙硫菌唑WP 240 g/hm2防治效果最好，病穗率防效在80%～95%之间，平均防效为86.54%。其次为40%叶菌唑SC 150 g/hm2，平均防效为75.12%，两者差异不显著。25%氰烯菌酯SC 375 g/hm2平均防效为68.99%，仅次于40%叶菌唑SC和25%丙硫菌唑WP（表3）。43%戊唑醇SC的防效显著低于40%叶菌唑SC、25%丙硫菌唑WP。40%多菌灵SC防效在农场间差异大，盐城北部和连云港农场的防效较好，接近25%氰烯菌酯SC，但差于40%叶菌唑SC、25%丙硫菌唑WP。
白马湖农场小麦成熟期逐穗脱粒检查，结果发现所有处理病穗率都较乳熟期有不同程度上升（表4），40%多菌灵SC处理区上升30多百分点，与对照趋于一致，病穗率防效仅0.87%；43%戊唑醇SC和50%咪鲜胺WP处理防效不理想，后期发病率明显上升，防效下降20百分点左右；40%叶菌唑悬浮剂防效下降10百分点左右；说明药剂没能完全阻止病菌侵染，只是暂时抑制了病菌生长，后期有小穗被侵染发病，只是外观上不容易识别而已。25%氰烯菌酯SC和25%丙硫菌唑WP发病率增幅小，防效变化不大。
2.3.2丙硫菌唑用量与防效
新洋农场25%丙硫菌唑WP有效成分180、240、300 g/hm2的病指防效分别为76.62%、83.75%和92.69%，用量增加防效提高， 300 g/hm2处理防效最高，显著高于其他处理。三河农场25%丙硫菌唑WP 3个用量的病指防效趋势与新洋农场一致，以300 g/hm2处理防效最高，防效为93.73%（表5）。
2.3.3叶菌唑用量与防效
白马湖农场赤霉病显症高峰后乳熟期调查（5月22日），40%叶菌唑SC 150 g/hm2的防效为77.09%，与25%氰烯菌酯SC 375 g/hm2基本一致，差异不显著。降低用量，效果明显下降，成熟期防效下降更明显（表6）。
2.4不同杀菌剂处理小麦产量
小麦抽穗期穗数已经稳定，产量完全决定于单穗生产能力。结果表明，供试杀菌剂均可增加单穗产量（表7）。40%叶菌唑SC和25%丙硫菌唑WP增幅最高，均达40.10%，25%氰烯菌酯SC与43%戊唑醇SC混用的增产效果，明显高于其单用的增产效果，与40%叶菌唑SC和25%丙硫菌唑WP的效果相当，多菌灵增产效果最低，仅为15.04%。
2.5喷施杀菌剂后小麦籽粒DON含量
喷施杀菌剂后小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量明显下降。杀菌剂单用下降幅度最大的是25%氰烯菌酯SC和25%丙硫菌唑WP，籽粒DON含量分别较对照减少86.16%和85.46%。减少25%氰烯菌酯SC含量后与43%戊唑醇SC混用效果也很好，DON降幅达到86.02%（表8）。
因不同农场赤霉菌菌株对多菌灵的抗性不同，施用40%多菌灵SC后小麦籽粒中DON毒素含量降幅差异较大，黄海农场40%多菌灵SC 750 g/hm2处理降低DON积累的效果最好，达81.39%，白马湖农场降低DON积累的效果最差，只有36.61%。总的来说，DON下降幅度与防治效果趋势一致。
3结论与讨论
病穗和稻桩上子囊壳分离菌株抗药性测定表明，2010年以前，抗多菌灵赤霉病菌群体在江苏农垦已普遍发生，抗性菌株的比例不高，多菌灵还有较好的防效。2010年以后由于赤霉病发生加重，为确保赤霉病不造成损失，垦区大剂量、高频率使用多菌灵，巨大的选择压力导致抗性菌株比例迅速提高。从地理分布看，淮南农场抗药性菌株比例高，病穗中抗多菌灵菌株比例高达98%以上，敏感菌几乎全部被抑制，多菌灵防效很低，多菌灵在这些农场继续使用意义不大。连云港、盐城北部农场多菌灵抗性菌株比例在20%左右，抗药菌株频率相当于淮南农场5～6年前水平，不积极主动治理难免重蹈淮南农场的老路。垦区应主动修改生产操作规程，使用替代药剂防治小麦赤霉病，以此作为抗药性治理、提高防治效果的手段。
试验发现，25%氰烯菌酯SC、40%叶菌唑SC和25%丙硫菌唑WP对小麦赤霉病的防治效果为70%～85%，其中25%丙硫菌唑WP的防效最高也最穩定。三种药剂的防效与病菌未产生抗性时多菌灵的防效相当。2014-2016年三年检测没有发现对氰烯菌酯和戊唑醇产生抗药性菌株。叶菌唑、丙硫菌唑与戊唑醇作用机制相似，说明病菌对这几个药剂还未产生抗性，可以选择使用。试验期间， 43%戊唑醇SC 322.5 g/hm2防效波动较大，与25%氰烯菌酯SC等有较大差距，单独使用控病效果不好。43%戊唑醇SC登记使用剂量只有105～150 g/hm2，不足我们试验用量的50%，按此剂量使用效果将更低。43%戊唑醇SC有效成分用量322.5 g/hm2对小麦安全，且增产显著，多点、多年表现一致。相比于对照区，处理区健穗增产接近10%。氰烯菌酯是赤霉病防治的成熟品种，防效高且后期发病增加不多，但多雨年份其他次要病害发生重会导致结实减少。氰烯菌酯与戊唑醇联合应用解决了杀菌谱不广的问题，防效明显提高，仅次于丙硫菌唑，增产作用与丙硫菌唑、叶菌唑相当。
赤霉病流行程度越重，药剂防效越低，自然发病率超过60%，依靠药剂把病穗率控制在10%以下有很大难度，有时虽然病指防效能达到80%～90%，产量也比较理想，但籽粒中赤霉病菌产生的毒素依然很高。2014年、2016年小区取样测定小麦籽粒中脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）含量，52个样本中，低于DON含量国家标准1 mg/kg以下样品只有2个。不同小麦品种，即使发病程度接近，其DON含量差异也很大。‘华麦4号’不施药对照样品的DON含量为55.11 mg/kg，‘淮麦22’只有10.5 mg/kg，说明小麦品种对籽粒毒素积累影响也很大。因此控制赤霉病危害、解决真菌毒素超标问题，单靠杀菌剂是十分困难的。垦区首先应依靠品种的抗性，在不同生态区种植发病相对较轻的小麦品种，以减轻流行程度。在这基础上根据品种抗性、常年发病程度确定药剂防治方案。氰烯菌酯和戊唑醇混用或使用氰烯菌酯复配剂是防治赤霉病比较现实的选择，可根据小麦品种抗性水平和常年发病程度确定配方剂量，建议43%戊唑醇SC不低于161.25 g/hm2、25%氰烯菌酯SC用量不低于240 g/hm2。叶菌唑、丙硫菌唑、叶菌唑目前国内没有登记，垦区可积极开展应用技术研究。
参考文献
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（责任编辑：杨明丽）
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