支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用价值
[摘要] 目的 探讨支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物检测在肺癌诊断中的应用价值。 方法 选取50例在我院就诊的肺癌患者为观察组，并选取同期在我院就诊的肺部良性病变患者30例为对照组。两组患者均予以行支气管肺泡灌洗，收集支气管肺泡灌洗液检测血清T淋巴细胞亚群、肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）及鳞状细胞癌相关抗原（SCC）。观察并比较两组肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物水平的差异。 结果 观察组患者支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞CD3+、CD4+水平明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，CD4+/CD8+水平明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）；观察组患者支气管肺泡灌洗液肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1、SCC 水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 肺癌患者免疫功能低下，辅助性T淋巴细胞减少，细胞毒性T淋巴细胞增加，检测支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物能为临床诊断肺癌提供依据。
[关键词] 肺癌；支气管肺泡灌洗液；T淋巴细胞亚群；肿瘤标志物
[中图分類号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2017）35-0132-04
[Abstract] Objective To explore the application value of T lymphocyte subsets and tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid in the diagnosis of lung cancer. Methods 50 patients with lung cancer treated in our hospital were selected as observation group and 30 patients with benign lung lesions in our hospital in the same period were selected as control group. The patients in the two groups were treated withbronchoalveolar lavage， and thebronchoalveolar lavage fluid was collected to detect serum T lymphocyte subsets， tumor markers including carcinoembryonic antigen（CEA）， cytokeratin 19 fragment（CYFRA21-1） and squamous cell carcinoma related antigen（SCC）. The differences of T lymphocyte subsets and tumor markers in the bronchoalveolar lavage fluid between the two groups were observed and compared. Results The levels of CD3+ and CD4+ in T lymphocytes ofbronchoalveolar lavage fluid in the observation group were significantly lower than those in the control group. The level of CD8+ in the observation group was significantly higher than that in the control group， the level of CD4+/CD8+ was lower than that in control group， and the differences were significant between the two groups（P<0.05 or P<0.01）. The levels of the tumor markers including CEA， CYFRA21-1 and SCC in the bronchoalveolar lavage fluid of the observation group were significantly higher than those in the control group， and the differences were significant（P<0.01）. Conclusion The lung cancer patients have low immune function， decreasedhelper T lymphocytes， increased cytotoxic T lymphocytes. Detection of T lymphocyte subsets and tumor markers in bronchoalveolar lavage fluid can provide the basis for clinical diagnosis of lung cancer.
[Key words] Lung cancer； Bronchoalveolar lavage fluid； T lymphocyte subsets； Tumor markers
肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高、病死率高，有研究显示肺癌的5年生存率不到15%[1]。早期诊断与治疗是治疗肺癌的关键，但目前临床上缺乏特异性的检查手段，临床上常通过X线、CT和磁共振等影像学检查进行初步诊断，但确诊有赖于肿块穿刺活检或手术切下的标本行病理检查，而通过穿刺活检可能造成肿瘤细胞扩散，并且手术创伤较大，部分患者可能并不需手术治疗，只需放化疗进行治疗，故限制了临床治疗[2]。支气管肺泡灌洗技术是通过支气管镜进行的无创操作技术，经过反复以无菌生理盐水灌洗、回收，灌洗液中含有支气管和肺泡脱落的细胞，能够获得下呼吸道病变的性质特点和活动程度，近年来逐渐应用于肺部肿瘤的诊断及治疗中[3-5]。本文探讨支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物水平对肺癌的诊断价值。
1 对象与方法
1.1 研究对象
选取2014年1月～2016年1月期间在我院就诊的肺癌患者共50例为观察组。纳入标准：均根据穿刺或术后病理结果证实符合原发性肺癌诊断。排除标准：①合并其他肺部疾病或其他恶性肿瘤肺转移；②合并严重的循环系统、消化系统、血液系统疾病；③不愿接受支气管镜检查。其中男36例、女14例；年龄54～76岁，平均（65.2±5.7）岁；按病理分为：小细胞肺癌9例（18.00%）、鳞癌27例（54.00%）、腺癌14例（28.00%）；按位置分为：左肺17例（34.00%）、右肺18例（36.00%）、两肺15例（30.00%）；按结节多少分：单发21例（42.00%）、多发29例（58.00%）；根据TNM分期分为：Ⅰa期3例，Ⅰb期3例，Ⅱa期8例，Ⅱb期7例，Ⅲa期12例，Ⅲb期14例，Ⅳ期3例。选取同期在我院就诊的肺部良性病变患者30例为对照组，所有患者均通过细菌学、影像学或病理学等检查方法明确诊断，其中男22例、女8例；年龄48～78岁，平均（64.5±5.5）岁；按肺部疾病分为：慢性阻塞性肺疾病13例（43.3%）、支气管扩张9例（30.0%）、肺炎5例（16.7%）、肺结核3例（10.0%）。两组患者的年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究方案经我院伦理委员会批准通过，纳入患者均知情同意，并签署知情同意书。
1.2检测方法
两组患者均在局麻下行支气管镜（Olympus BF-1T-240型）检查，根据影像学定位的病变部位，将支气管镜置于病变部位，使用生理盐水进行反复灌洗，总量约为100 mL，回收灌洗液约50 mL，30 min内送检支气管肺泡灌洗液。将灌洗液过滤，去除黏液与杂质，采用离心机予以低温1500 r/min离心约10 min，使用RP-MI1640培养液清洗后悬浮于加入10%小牛血清的培养液中，在37℃培养箱中培养1 h，采集细胞。使用抗CD3+、抗CD4+、抗CD8+、单克隆抗体进行染色后检测T淋巴细胞亚群（美国BD FACSCalibur流式细胞仪）。使用放射免疫法检测癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1），酶联免疫法检测鳞状细胞癌相关抗原（SCC），所需试剂盒均采购自瑞士罗氏公司，操作程序严格按照试剂盒所附的说明书进行实验操作。
1.3观察指标
观察并比较两组支气管肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群的变化，包括CD3+（68%～77%）、CD4+（41%～51%）和CD8+（23%～30%）水平以及CD4+/CD8+（1.4～2.0）的比值，并比较两组肿瘤标志物CEA（0～5 ng/mL）、CYFRA21-1（0～3.3 ng/mL）和SCC（0～2.5 ng/mL）的水平。
1.4 统计学方法
采用SPSS17.0 for windows统计学软件进行分析处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，各项数据服从正态分布，组间比较采用成组t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组患者支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群水平比较
观察组患者支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞CD3+和CD4+水平明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，CD4+/CD8+水平明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）（表1）。
2.2两组患者支气管肺泡灌洗液肿瘤标志物水平比较
观察组患者支气管肺泡灌洗液肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1和SCC水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）（表2）。
3讨论
近年来，随着经济的发展，空气污染不断加重，肺癌患者逐年增多，在我国经济发达区域，肺癌的发病率已跃居所有恶性肿瘤的第一位[6]。肺癌起病隱匿，早期常无临床症状，有研究显示超过50%的肺癌患者确诊时已经是晚期，错过最佳的治疗时间，严重影响患者的预后[7，8]。目前临床上诊断肺癌的辅助检查较多，包括血清肿瘤标志、CT、磁共振、纤维支气管镜、肺穿刺活检等[9-11]，其中纤维支气管镜活检和刷检是最主要的手段，但部分肺癌，特别是周围型肺癌无法通过纤维支气管镜确诊[12，13]。60年代后期随着可曲性光纤维支气管镜的开发和应用，逐渐兴起支气管肺泡灌洗。自1974年Reynolds和 Newball报道支气管肺泡灌洗技术以来，为研究某些肺疾病，特别是某些间质性肺疾病，如结节病、特发性肺纤维化（IPF）、过敏性肺泡炎、肺泡蛋白沉积症、胶原血管病伴间质性肺疾病（CVD-ILD）、组织细胞增多症、尘肺、肺损伤与修复及免疫受损患者的肺部感染等疾病，开辟了一个新的研究途径和检测手段，有学者甚至将支气管肺泡灌洗液称为“液体肺活检”[14]。
支气管肺泡灌洗技术具有无创性等优点，但灌洗液的检测成分较多，其中检测肿瘤标志物如CEA、CYFRA21-1、SCC等最为多见。CEA是一种蛋白多糖复合物，广泛存在于内胚叶起源的肿瘤中，能反映人体多种肿瘤的存在[15]。CYFRA21-1是上皮细胞的结构蛋白之一，在恶性上皮细胞中由于肿瘤细胞的加速降解导致大量CYFRA21-1释放[16，17]。SCC是一种糖蛋白存在于子宫颈、肺、头颈等非角化癌的细胞中[18]。当肺恶性肿瘤发生时血清中3种肿瘤标志物将明显升高，而肺泡灌洗液中3种肿瘤标志物的浓度更是血清中的数倍，其对肺癌的诊断价值已经得到临床的广泛认可[19]。本次研究也发现观察组支气管肺泡灌洗液肿瘤标志物CEA、CYFRA21-1和SCC 水平均高于对照组，与国内报道相近[20-22]。近年来有研究显示肺癌会对患者的细胞免疫功能造成影响，患者会出现局部或全身免疫功能障碍，这与肿瘤的发生、发展密切相关[23-27]。T淋巴细胞是介导细胞免疫的重要因子，其包括辅助性T淋巴细胞CD3+、CD4+和细胞毒性淋巴细胞CD8+，其中辅助性T淋巴细胞具有杀伤肿瘤的作用，而细胞毒性T淋巴细胞能分泌免疫抑制因子，具有抑制效应性T细胞活化的作用，从而减少对肿瘤细胞的杀伤作用。杨国辉等[12]报道肺癌患者支气管肺泡灌洗液中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均降低，存在明显的T淋巴细胞功能紊乱。而莫扬[27]报道肺癌患者Th水平下降，Th/Ts比值较正常人明显下降。本研究结果显示观察组患者支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞CD3+、CD4+水平明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，CD4+/CD8+水平明显低于对照组。由此结果可以发现肺癌患者的辅助性T淋巴细胞CD3+、CD4+水平会出现下降，而细胞毒性T淋巴细胞CD8+会出现上升，本文认为这与肺癌患者免疫功能普遍低下相关，局部低下的免疫功能更加有利于肿瘤细胞的快速生长。而对于肺部良性病变患者，疾病往往不影响局部细胞免疫功能，因此肺泡灌洗液中T淋巴细胞水平处于正常水平。因此通过检测支气管肺泡灌洗液中T淋巴细胞及肿瘤标志物水平能有效地预测肺癌的发生与发展，为早期诊断肺癌提供有效的帮助。但本研究未对不同分期及不同病理类型肺癌患者的支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞及肿瘤标志物水平进行比较，在下一步研究中加以完善。
总之，肺癌患者免疫功能低下，辅助性T淋巴细胞减少，细胞毒性T淋巴细胞增加，检测支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群及肿瘤标志物能为临床诊断肺癌提供依据。
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（收稿日期：2017-08-30）