ADAM17、EGFR和Ki—67在脑胶质瘤中的表达及意义
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1.1 一般材料
收集2010年1月～2013年12月承德医学院附属医院收治的60例脑胶质瘤手术的切除标本，所有患者术前未经过放化疗。其中男32例，女18例；年龄27～76岁，中位年龄45岁。60例脑胶质瘤中，星形细胞瘤12例，少突胶质细胞瘤11例，间变型星形细胞瘤9例，胶质母细胞瘤28例。按2007年WHO有关神经系统肿瘤分级，将上述患者分为低度恶性组（I～II级胶质瘤23例）和高度恶性组（III～IV级胶质瘤37例）。另外，取脑外伤手术减压的脑组织9例作为对照组。
1.2 主要试剂
兔抗人ADAM17多克隆抗体购自美国Adcam公司；鼠抗人EGFR单克隆抗体、兔抗人单克隆抗体Ki-67、DAB显色剂、SABC-POD试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
1.3 免疫组织化学染色法
石蜡切片经脱蜡、高压抗原修复后，3% H2O2室温孵育5～10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性。血清封闭后，滴加抗ADAM17、EGFR和Ki-67的I抗（1︰100稀释），4℃过夜，次日用PBS冲洗，滴加相应II抗，孵育30 min，PBS冲洗，滴加SABC（链酶亲和素-生物素-过氧化物酶），继续孵育30 min后DAB显色，苏木精复染，脱水透明，显微镜下观察。阴性对照组以PBS代替一抗。
1.4 结果判定方法
400 倍光镜下观察，每例选择3张切片，每张切片随机选5个视野。光镜下ADAM17和EGFR蛋白以细胞浆内出现棕黄色细颗粒为阳性表达，Ki-67阳性表达主要在细胞核出现棕黄色颗粒。参照文献[5]，根据阳性细胞的百分率分为4个等级，0分：无阳性细胞；1分：<30%；2分：30～70%；3分：>70%。按染色强度分为4个等级，0分：无阳性细胞；1分：染色呈浅黄色；2分：呈黄色；3分：棕黄色。阳性细胞数评分与染色强度评分相加作为最后综合评分：阴性（0分）；弱阳性（1～2分）；阳性（3～4分）；强阳性（5～6分）。阳性表达率为所有阳性结果的百分率。
1.5 统计学方法
结果采用SPSS 18.0统计软件对所获数据进行统计学处理，选用χ2检验进行数据分析，ADAM17、EGFR和Ki-67之间的相关性采用Spearman等级相关分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ADAM17的表达情况
ADAM17在对照组中阳性表达率为22.2%（2/9），2例阳性表达全部是弱阳性。60例脑胶质瘤组织中，ADAM17的阳性表达率为80.0%（48/60），其中低度恶性组的阳性表达率是56.5%，以阳性表达为主；高度恶性组的阳性表达率是94.6% ，以强阳性表达为主。低度恶性组和高度恶性组的阳性率比较差异有统计学意义（χ2=10.58，P < 0.01）。见图1、表1。
A：对照组；B：低度恶性组；C：高度恶性组
图1 解聚素-金属蛋白酶17在不同恶性程度的脑胶质瘤中的表达（400×）
表1 ADAM17在不同恶性程度的脑胶质瘤中的表达
注：ADAM17：解聚素-金属蛋白酶17
2.2 EGFR的表达情况
EGFR在对照组中无表达。60例脑胶质瘤组织中，EGFR的阳性表达率为60.0%（36/60），其中低度恶性组的阳性表达率是39.1%，以阳性表达为主；高度恶性组的阳性表达率是73.0%，以强阳性表达为主。低度恶性组和高度恶性组的阳性率比较差异有统计学意义（χ2=6.77，P < 0.01）。见图2、表2。
A：对照组；B：低度恶性组；C：高度恶性组
图2 表皮生长因子受体在不同恶性程度的脑胶质瘤中的表达（400×）
表2 EGFR在不同恶性程度的脑胶质瘤中的表达
注：EGFR：表皮生长因子受体
2.3 Ki-67的表达情况
Ki-67在对照组中无表达。60例脑胶质瘤组织中，Ki-67的阳性表达率为63.3%（38/60），其中低度恶性组的阳性表达率是26.1%；高度恶性组的阳性表达率是86.5%，以强阳性表达为主。低度恶性组和高度恶性组的阳性率比较差异有统计学意义（χ2=22.28，P < 0.01）。见图3、表3。
2.4 ADAM17、EGFR和Ki-67表达的相关性
60例脑胶质瘤组织中，ADAM17和EGFR两者双阴性的表达率为15.0%（9/60），双阳性的表达率为56.7%（34/60），统计结果显示两者呈明显的正相关性（r = 0.612，P < 0.01）；ADAM17和Ki-67两者双阴性的表达率为15.0%（8/60），双阳性的表达率为56.7%（35/60），统计结果显示两者呈明显的正相关性（r = 0.574，P < 0.01）；EGFR和Ki-67两者双阴性的表达率为18.3%（11/60），双阳性的表达率为41.7% （25/60），统计结果显示两者呈明显的正相关性（r = 0.447，P < 0.01）。
3 讨论
脑胶质瘤发病机制复杂，临床治疗效果差，深入研究其发病机制有助于找到更好的预防、诊断、治疗胶质瘤的方法。EGFR是原癌基因CerB1 （HER1） 的表达产物，是表皮生长因子受体家族成员之一，该家族包括HER1、HER2、HER3 和HER4[2]。EGFR 信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥着重要的作用[6]。研究表明，在许多实体肿瘤中EGFR基因出现扩增、重排或突变， 使其表达增多或持续活化，借助于下游的信号转导途径，EGFR促进肿瘤细胞的增殖、血管生成、肿瘤侵袭、转移及抑制细胞凋亡等[7]。本研究结果显示EGFR在对照组中无表达，在脑胶质瘤组织中随着恶性程度的增加表达逐渐增强，在60例胶质瘤组织中EGFR总的阳性表达率为60.0%，低度恶性组的阳性表达率（39.1%）和高度恶性的阳性表达率（73.0%）比较，差异有统计学意义（P < 0.01）。这与文献中的报道基本一致，说明EGFR参与胶质瘤的发生发展。EGFR在分化差的胶质瘤中表达强度明显增高，其高表达可认为是胶质瘤分化不良的标志，与胶质瘤恶性程度密切相关[8]。
ADAM17在人类多种恶性肿瘤中都有异常表达，研究发现ADAM17在乳腺癌、胃癌、肝癌和肺癌等多种癌细胞中表达均增高，其可以通过EGFR-PI3K-AKT信号通路促进癌细胞的增殖、侵袭和迁移[9-12]。张艳等[13]曾利用免疫印记法检测发现ADAM17在脑胶质瘤中表达增高。本研究采用免疫组织化学法，发现ADAM17在胶质瘤中的阳性表达率（80.0%）显著高于对照组（22.2%），且高度恶性组的阳性表达率（94.6%）明显高于低度恶性组的阳性表达率（56.5%），差异均有统计学意义（P < 0.01），说明ADAM17在脑胶质瘤中表达增多，且随着胶质瘤恶性程度的增高表达更为强烈。Wu B等[14]也报道ADAM17在高度恶性胶质瘤组织中的表达高于低度恶性的胶质瘤。提示ADAM17与脑胶质瘤的发生和发展过程密切相关。ADAM17具有蛋白剪切酶样作用，通过剪切使蛋白细胞膜外功能区脱落，激活或释放许多结构和功能不同的分子，从而调节细胞的多种生物学行为[15-17]。研究显示，ADAM17可剪切活化脱落双调蛋白、TGF-β等EGFR的配体，活化EGFR及其通路，增强肿瘤细胞的增殖和运动活性[18]。本研究中相关性分析结果显示，ADAM17与EGFR呈正相关关系（r=0.612，P < 0.05），说明ADAM17与EGFR密切相关，ADAM17对EGFR可能具有调节作用。
Ki-67是一种增殖细胞相关的核抗原，在静止期细胞中不表达，但在各期增殖细胞中均有表达，因此可反映细胞增殖水平，被认为是评估肿瘤增殖活性常用的最可靠的指标[19-20]。本研究结果显示Ki-67在对照组中无表达，而在胶质瘤中阳性表达率高达63.3%，且高度恶性组的阳性表达率（86.5%）显著高于低度恶性组的阳性表达率（26.1%）。说明随着胶质瘤恶性程度的增加，肿瘤细胞的增殖能力亦增加。另外，本研究还进一步发现Ki-67的表达与ADAM17、EGFR的表达呈正相关关系（r = 0.574、0.447，P < 0.05），表明ADAM17和EGFR与胶质瘤细胞异常增殖有关，提示ADAM17和EGFR可能具有促进胶质瘤细胞增殖的作用。
综上所述，ADAM17、EGFR均在脑胶质瘤的发生和发展中发挥了重要作用，Ki-67可作为判断肿瘤恶性程度及预后的一个有价值的辅助指标，ADAM17、EGFR和Ki-67与脑胶质瘤的分化程度和增殖能力密切相关。联合检测ADAM17、EGFR和Ki-67并结合临床参数对指导临床治疗和评价预后有一定应用价值。
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（收稿日期：2015-11-15 本文编辑：赵鲁枫）