乳腺癌患者中Ki—67蛋白的表达及其意义
【摘要】 目的 检测 Ki-67蛋白在乳腺癌组织中的表达， 及其与乳腺癌肿瘤病理核分裂像计数、淋巴结转移、临床病理学指标间的关系。方法 采用免疫组织化学技术检测乳腺癌组织中 Ki-67蛋白的表达， 分析阳性表达与乳腺癌病理核分裂像计数、腋窝淋巴结转移、雌激素受体 （ER）和孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体 -2（HER-2）表达之间的关系。结果 Ki-67蛋白在乳腺癌病理核分裂像计数的表达与恶性程度具有显著的相关性；Ki-67蛋白在 ER和 PR阳性组中表达显著低于 ER和 PR阴性组 ， 而在 HER-2阳性组中表达显著高于 HER-2阴性组。结论 Ki-67可作为判断乳腺癌患者预后及疗效的重要标志物 ， 同时联合检测 Ki-67和其他乳腺癌病理学指标有助于了解乳腺癌生物学行为 ， 为治疗和预后提供思路。
【关键词】 乳腺癌；Ki-67蛋白；病理核分裂像计数；淋巴结转移；ER；PR；HER-2
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤 ， 近年来研究发现 ， 已知雌激素受体（ER）、孕激素受体 （PR）和人类表皮生长因子受体 -2（HER-2）均于乳腺癌的发生发展密切相关。Ki67的发现 ， 被认为是能够有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标志物。本科针对 Ki-67与乳腺癌肿瘤病理分期、淋巴结转移、临床病理学指标（ER、PR、HER-2）之间的关系开展了研究 ， 报告如下。 1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院 2011年 1月至 2013年 3月手术切除的乳腺癌组织标本 300例， 均为女性， 患者年龄 32～81岁 ， 平均 （44.9±3.7）岁。所有患者均经术后病理组织学确诊乳腺癌 ， 且术前未经过放疗、化疗等辅助治疗。腋窝淋巴结有转移者 94例， 无转移者 206例。
1. 2 病理核分裂像计数评价标准 所有病理组织的核分裂像计数参照 Bloom-Richardson系统的 Nottingham改良方案 ， 计算出在乳腺组织细胞生长活跃密集区域随机挑选 20个高倍视野 （×400）， 计算每 10个高倍视野 （10HPF）中的细胞核分裂像数 ， 0～1个 /10HPF：1分；2～3个 /10HPF：2分；>3个/HPF：3分 ， 分数越高 ， 表示癌细胞恶性程度越高[1]。本研究中， 1分有13例， 为低度恶性组；2分有188例， 为中度恶性组；3分有 99例， 为高度恶性组。
1. 3 Ki-67、ER、PR和 HER-2测定方法 所有乳腺癌病理学指标均采用免疫组织化学染色方法进行测定：石蜡包埋组织块切片后脱蜡至水 ， DAB染色后用苏木精复染 ， 封固采用中性树胶。阴性对照采用 PBS缓冲液替代一抗。Ki-67蛋白的测定采用相对定量法 ， 选取阳性信号最强区域 （×400）计数 200个肿瘤细胞中阳性细胞数目 ， 同时计算阳性细胞占200个细胞比例。ER和 PR阳性：癌细胞核阳性细胞 >1%；HER-2阳性：浸润性癌细胞膜强阳性细胞 >30%[1]。其中ER阳性组192例， 阴性组108例；PR阳性组162例， 阴性组 138例；HER-2阳性组 60例， 阴性组 240例。
1. 4 实验试剂和仪器 所有试剂盒、免疫组织化学染色试剂及Ki-67、ER、PR和 HER-2的一抗、二抗均购自北京中山生物技术有限公司。
1. 5 统计学方法 SPSS 13.0软件分析 ， 计量数据采用均数±标准差 （ -x±s）表示 ， 组间比较采用 t检验；计数资料采用百分比表示 ， P>0.05， 差异无统计学意义 ， P<0.05， 差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 Ki-67蛋白表达与病理组织的核分裂像计数关系 Ki-67蛋白表达与病理组织的核分裂像计数关系， 见表1。
2. 2 Ki-67蛋白表达与腋窝淋巴结转移关系 Ki-67蛋白表达与腋窝淋巴结转移关系， 见表2。
3 讨论
3. 1 Ki-67蛋白与乳腺癌组织学的相关性 Ki-67抗原只与增生细胞核反应 ， 无组织特异性 ， 在各类恶性肿瘤组织中 ， Ki-67的表达都远高于正常组织 ， 可以由此有效评估细胞增殖水平。早在 1983年 ， Ki-67就因其仅和增生的细胞核反应 ， 具有操作简单、特异性强的特点 ， 成为了病理科免疫组化染色的常用增殖细胞免疫标记之一[2]。已有较多研究显示：Ki-67的表达和乳腺癌的病理学分级和临床分期 ， 包括淋巴结转移密切相关。值得注意的是 ， Ki-67在正常乳腺组织和乳腺上皮细胞纤维腺瘤中的表达水平远远低于乳腺癌细胞 ， 阳性率<3%；且 Ki- 67阳性的乳腺癌患者比阴性患者预后差 ， 提示Ki-67。有可能成为未来乳腺癌分型的指标。
3. 2 Ki-67蛋白与ER、PR、HER-2乳腺癌病理学指标的关系 雌、孕激素与乳腺癌发病与转归密切相关， 一般来说 ， ER和 PR阳性的乳腺癌分化程度高、恶性度较低、淋巴结转移慢、预后较好 ， 这可能与ER、PR阳性的乳腺癌患者对于内分泌治疗较ER、PR阴性患者更加敏感有关[3]。且目前多数研究认为 Ki-67蛋白的表达和 ER及 PR呈负相关 ， ER、PR表达阴性者的 Ki-67指数显著高于阳性者， 这与 Ki-67蛋白表达水平较高的乳腺癌患者预后较差是一致的[4]。
HER-2属于表皮生长因子受体家族中的一员 ， 定位于17号染色体长臂 2区 1带 ， 平时静止状态时调节细胞生长、增殖和分化；当遭到激活时 ， 具备肿瘤转化的特性 ， 其过量表达提示乳腺癌恶性程度高 ， 对于内分泌治疗效果较差 ， 生存期较短 ， 预后不佳 ， 被认为是预测乳腺癌预后重要的生物学因子。多数研究显示 HER-2表达与 Ki-67呈正相关 ， 提示可以利用它们作为预测化疗和内分泌治疗疗效的重要敏感性指标。具体为：HER-2蛋白和 Ki67蛋白表达下降越明显 ， 则化疗和内分泌治疗的疗效就越肯定[5]。
在作者对于 Ki-67蛋白在乳腺癌组织中的表达情况的研究中 ，发现① Ki-67蛋白在病理组织分型趋向恶性、淋巴结存在转移的乳腺癌患者组织中表达更高 ，说明 Ki-67可以用于乳腺癌患者的疾病评估和预后分析；② Ki-67与ER、PR呈负相关 ， 与 HER-2呈正相关 ， 提示 Ki-67可以和 ER、PR、HER-2共同作为乳腺癌临床病理学指标来预测患者对于化疗和内分泌治疗的疗效 ，为患者术后进一步治疗提供参考。
参考文献
[1]邢家亮 . Ki-67表达与乳腺癌临床病理学指标的相关性分析 .山东大学 ， 2012.
[2]刘毅 ， 张洪兰 ， 陈昊 ， 等 .新辅助化疗对乳腺癌患者Ki-67、ER、Her-2和 p53的影响及意义 . 中国肿瘤外科杂志 ， 2012， 4（6）： 348-351.
[3]吴秀平 ，杜毅力 ，曹永政 ，等 .探讨超声弹性成像参数与乳腺癌腋
窝淋巴结转移及 Ki-67表达的相关性 .中国医学影像技术 ， 2012， 28（5）：921-924.
[4]王永南 ，王颀 ，张安秦 ， 等 .Ki-67与分子亚型预测乳腺癌新辅助化疗敏感性的研究 . 中华肿瘤防治杂志 ， 2012，19（23）：1805¬1809.
[5]徐立坤 ， 李涌涛 . Ki-67 和 BRCA1 在≤ 35 岁乳腺癌组织中的表达及临床意义 . 实用肿瘤学杂志 ， 2012， 27（ 2）：123-128.