志贺菌检验技术的研究进展分析

【中图分类号】R373 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2017）04-0-01

志贺菌作为一种肠道传染病菌，是经消化道传播，会对肠黏膜上皮细胞造成侵袭，导致排黏液脓血便、腹泻、腹痛以及高热等症状。相关统计数据显示，每年感染痢疾的人数高达1.6亿人，而死亡的人数则高达1.1万，在死亡病例中则主要为年龄小于5岁的儿童[1]。与发达国家相比较，发展中国家的卫生条件更差，痢疾感染率也更高，而志贺菌则是引起感染性腹泻病的主要病原菌。所以对志贺菌进行快速和有效的检验，对于疾病的防治就显得非常重要。

1.志賀菌生物学特征分析

志贺菌作为兼性厌氧革兰阴性短小杆菌，无鞭毛、无荚膜、无芽胞，大部分均存在菌毛；志贺菌对营养的要求较低，在普通培养基上就能生长，而生长的最佳PH值、温度分别为7.2-7.4、37℃。志贺菌能对葡萄糖进行分解，不产气能产酸，尿素和V-P试验表现为阴性，不会形成硫化氢，不能利用丙二酸盐或者柠檬酸盐。志贺菌属包括表面抗原和菌体抗原，通过菌体抗原能对菌型进行区别，表面抗原则能对菌体抗原与相应抗血清的凝集反应进行有效阻止。按照菌体抗原、生化反应的差异，可以将志贺菌分为不同血清群，分别为宋内志贺菌、鲍氏志贺菌、福氏志贺菌、痢疾志贺菌。

2.志贺菌常规检验技术分析

志贺菌常规检验技术的步骤主要为培养增菌、纯化分离、生化试验、血清学鉴定分型，该技术作为检验志贺菌的基础方法，现阶段已纳入到了国家标准，志贺菌常规检验技术的全程用时一般为3-5天，检验结果能对标本的真实状况进行稳定、准确和直观地反应。在实际的实验中，要想让检出率显著提高，则可以选择敏感性低的麦康凯、选择性强的木糖赖氨酸去氧胆酸钠（XLD）或者HE培养基，然而应谨慎使用沙门氏菌-志贺菌分离培养基。法国梅里埃公司所生产的显色培养基，其特异性和敏感性较高，能直接分离和鉴定志贺菌[2]。志贺菌常规检验技术的特异性低，而且操作比较繁琐、费时费力，而且要求检测者有丰富的检测经验，检验结果是否准确可靠，在很大程度上依赖检测者的专业素质和实验时的工作状态，成为检验部门的一项沉重负担，无法满足快速处理的要求，对于突发公共卫生事件的处理和大批量健康人体的体检需求无法有效满足。因此有必要探索更为准确、快捷、有效的志贺菌的检验方法。

3.志贺菌的自动化分析仪检验技术

在现代医学技术快速发展的过程中，微生物检验则正向着自动化分析仪检验技术的方向所发展。美国分析化学家协会将法国生物梅里埃公司的Vitek-Ams系统作为全自动微生物分析系统的标准方法，其基础为细菌的微量生化反应，通过仪器对微量培养基的发酵情况进行自动检测，计算机按照所接收的发酵信息来换算，同时和数据库对比，获得检验结果。

4.志贺菌的化学鉴定技术

分析发现，在细菌的细胞质、细胞壁及其内含物中，化学分类信息比较丰富。多糖、蛋白质、极性脂类、脂磷壁酸、脂溶性色素等也为化学分类法的应用打下了基础。临床研究发现，通过对病原菌中的弧菌属、志贺菌属、沙门菌属、大肠埃希菌属进行分析时，发现不同的细菌间细菌脂肪酸组成比例存在显著差异，通过组成差别则能快速诊断病原菌[3]。

20世纪50年代以来，为了寻求快速、准确、简便、微量的检验方法，国内外学者进行了大量的研究，从以传统方法为基础发展到以免疫学为基础的或以分子生物学为基础的快速检测方法，并在实践检验中不断取得新进展[4]。

5.志贺菌的免疫学检验技术

5.1 酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法作为使用最多、发展最快、应用最早的一种检验方法，是经免疫学或者化学的方法，将免疫反应物形成酶标记物，并和待检验样品中的相应抗体或者抗原结合，然后形成免疫复合物，经水解或者酶催化后，利用酶标仪、肉眼来对底物所产生的颜色进行观察。通过间接酶联免疫吸附法来对志贺菌纯培养液进行检测，具有较高的重复性、准确度和特异性，适合用来快速检测志贺菌，特别适合在基层进行应用和推广。但是酶联免疫吸附法的试剂具有较高的选择性，不能对多种成分进行同时分析，对于结构类似的化合物存在交叉反应，保存方法、时间、温度、环境等因素容易对检验结果造成影响，所以需要辅助方法来进行检验[3]。

5.2 SPA协同凝聚法

SPA是指金黄色葡萄糖球菌A蛋白，处于菌体细胞壁的表面，能非特异性结合IgG的Fc段[5]。在SPA和大量抗体结合后，能显著提高其灵敏度，能在1-2天内获得结果，所以SPA协同凝聚法具有操作简单方便、灵敏、快速等特点，对于食品安全检验和检测工作的需求能有效满足。

5.3 蛋白质印迹法

蛋白质印迹法作为蛋白质测定技术之一，是通过特异性抗体检测样品中的多克隆抗体或者微量抗原来对单克隆抗体进行检测，同时连续分析转移到固相膜上的蛋白质[6]。蛋白质印迹法具有较高的敏感度和特异性，能长时间保存固相膜，而且不需要对靶蛋白实施放射性核素标志。

6.志贺菌的分子生物检验技术

6.1 PCR技术

PCR作为临床中应用非常广泛的一种分子生物学诊断技术，其基础为核酸生物学。PCR技术的原理和DNA天然复制过程比较类似。和常规培养检测相比较，PCR检测志贺菌的阳性率显著更高，然而却容易造成污染，出现假阳性，而且技术要求和检测费用比较高，进而对其应用造成一定的限制。

6.2 基因芯片

基因芯片也被称之为DNA微阵列、DNA芯片、寡核苷酸阵列，选择显微打印或者原位合成手段，在支持物表面骨化DNA探针，形成二维DNA探针阵列，并和标志物品杂交，对杂交信号进行检测，进而来实现高效、快速检测生物样品。基因芯片技术具有较高的敏感性和特异性，而且操作简单方便，自动化分析结果，进而来有效防止人为因素所引起的错误。

6.3 基因探针

基因探针是通过人工合成的方式，从微生物中制备DNA片段，对其进行纯化，然后将荧光物质、生物素、同位素等标记上，形成具有特异性的DNA探针，对待测样品和标志性DNA探针间有无杂交分子进行检测，进而来对样品中有无目标微生物进行判断。采用基因探针技术能对DNA核酸序列点突变进行准确和直接的分析，然而假阳性却比较长，和常规PCR检测相比较，基因探针技术的检验时间较长，不适合用于快速检测。

除此之外临床中常用的分子生物检验技术还包括随机扩增多态性DNA技术、脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）以及聚合酶链反应技术等。

7.小结

在我国社会经济快速发展的过程中，食品安全卫生检测标准也越来越高，采用便捷、准确和快速的检验技术也就显得越来越关键。现阶段临床中在对志贺菌进行检测时，可供选择的方法较多，各种检验方法也均具有各自的优点和不足，在实际的检验中，应结合检验的实际要求来选择合理的检验技术，进而来保证检验结果的准确性。

参考文献：

[1]陈峰，吴尔翔，丁锁顺等.二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测志贺菌方法的建立及初步应用[J].中国人兽共患病学报，2013，29（9）：886-890.

[2]李劲锋.志贺菌志贺菌检验技术的研究进展[J].职业与健康，2014，30（13）：1874-1877.

[3]薛泽润，王颖芳，段广才等.志贺菌志贺菌中成簇规律间隔短回文重复序列的分子分布特征[J].中华流行病学杂志，2015，36（8）：875-878.

[4]黎敏英， 邓树轩， 叶朗光，等. 沙门氏菌检测方法研究进展[J]. 畜牧与饲料科学， 2009， 30（03）：138-140.

[5]陈柳军，邹碧，余钧池等.一株与沙门菌性状非常相似的鲍氏志贺菌鉴定结果分析[J].现代预防医学，2011，38（1）：135-136.

[6]盛跃颖，陈洪友，张曦等.免疫磁珠捕获法检测志贺菌志贺菌的模拟研究[J].检验医学，2012，27（3）：167-170.

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