酶联免疫法检测配方奶粉乳铁蛋白含量研究
摘 要：购买进口婴幼儿奶粉是国人的习惯，但对进口奶粉的质量缺乏正确的认识。为此，采用酶联免疫方法对超市等地销售的进口奶粉中的乳蛋白含量进行测试，乳铁蛋白是奶粉的主要营养成分。我国相关法律将乳铁蛋白定义为婴儿营养强化剂，具有提高婴儿免疫力、抗病毒并且促进吸收的作用。乳铁蛋白的特征以及酶联免疫法的具体检测方法。
关键词：酶联免疫法；婴幼儿配方奶粉；乳铁蛋白；进口奶粉；研究
中图分类号：TB
文献标识码：A
doi：10.19311/j.cnki.16723198.2016.31.090
母乳是婴儿获取营养最好的方式，母乳中含有一定量的乳铁蛋白可以确保婴幼儿健康。但就现状而言，母乳匮乏。因此奶粉喂养就成为主流，婴幼儿奶粉的市场巨大。但由于国内奶粉频频出现问题，国人购买进口奶粉的欲望强烈。但进口奶粉是否真的安全，还需要数据来证明。以母乳为标准，婴幼儿奶粉的主要成为应为乳铁蛋白。调查显示，很多进口奶粉中的乳铁蛋白含量较低，无法满足婴儿的营养的需求。酶联免疫法是检测奶粉中营养成分的主要方法，因此文章采用这一方法对一定数量的奶粉进行了检查，并公布了乳铁蛋白含量。
1 乳铁蛋白的特征以及酶联免疫法
乳铁蛋白是婴幼儿哺乳中不可缺少的一种元素，主要成分为非血红素和天然蛋白糖。人类第一次用固相和液相色谱法分离乳铁蛋白是在1959年，乳铁蛋白对婴儿的免疫系统强化具体积极意义，同时能够抗病毒和促进婴儿吸收。母乳中乳铁蛋白的含量丰富，用于赖以生存的营养元素。但是随着母乳哺乳水平的降低，奶粉应运而生。检验奶粉中乳铁蛋白含量是十分重要的，一般要求，乳铁蛋白的含量要在1-7ml以上才符合要求。随着社会对于乳铁蛋白的认可，在奶粉中添加乳铁蛋白已经成为一种趋势，食品中添加乳铁蛋白也得到法律的支持。我国在法律上也将乳铁蛋白定位为奶粉等食物中营养的强化剂，并对含量做出基本要求。我国主要奶粉进口国包括澳大利亚、新西兰、荷兰和瑞士等，这些国家的奶制品质量较高，但由于对乳铁蛋白的含量要求不同，因此对进口乳铁蛋白的检测是必要的。目前，我国应用较为广泛的乳铁蛋白检测方法为免疫扩散检测法或者酶联免疫法。我国对于国外奶粉的检测较为严格，对由于缺乏对数量合理性的认定，检测结果还存在一定的疑问。至2012年起，我国相关部门就开始对婴幼儿奶粉质量上提高可关注，通过定期试验的方法来检测进口婴幼儿奶粉中的乳铁蛋白含量，并形成报告，但唯一的缺陷是，虽然民众对于乳铁蛋白的作用以及进口奶粉中乳铁蛋白含量的要求尚不明确，因此我们以文献的形式研究检测结果。
2 酶联免疫法使用的准备阶段
酶联免疫法是目前婴幼儿配方奶粉营养成分检测的主要手段，具有较好的效果。检测中所使用的样品为16种市面上热销的婴儿奶粉，本次检测主要检测奶粉中乳铁蛋白的含量。产品来自美国、新西兰等16个国家，其中奶粉的罐体上都有具体的含量标识，范围在5～100mg/100g之间，我们通过该方法检测其真实性。所选的检测仪器为全自动酶仪包被有抗牛乳铁蛋白（LT）的特异性多克隆抗体96孔微孔板，配合洗涤液和缓冲溶液，乳铁蛋白标准品和乳铁蛋白-过氧化物酶结合物，另外还包括1mol/L磷酸终止液，目的就是检验出进口婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的含量。将溶液稀释后冷藏于2～8℃之间。稀释溶液的配置选择1ml浓缩洗液和4ml蒸馏水，同样冷藏于2～8℃环境中。取适量实验所需的元素，包括氯化钠、氯化钾、磷酸钠等。将其溶于蒸馏水中，并将其调整微碱性，最后配置成1L的该浓度溶液备用。将奶粉样品称好后放于准备好的容器中，本次实验称取质量为1.00g的奶粉样本，将其按照标准稀释之后进行检测，检测后将乳蛋白的含量公布，尤其是对不符合规定的产品进行惩罚。
3 酶联免疫法检测方法的实施
在本次检测中，我们采用平行检测的方法，将各自100升的溶液加入到微孔中，在不接触两种样品的同时添加100l酶的结合物，1h避光孵育后，进行3次洗板，在每孔中加入底物100lTMB，室温控制在（21℃±3℃，孵育时避光进行10min，在每孔中加入终止液50l后，采取酶标仪在450nm条件下读取吸光值。取选取的6种进口奶粉各1.0g作为样品。使用PBS溶液300ml稀释到要求浓度。本次检验中的结果采用标准的曲线显示，显示结果中，有近三成进口婴幼儿配方奶粉的乳铁蛋白的含量不达标，提醒国民要注意选取。
4 酶联免疫法检测进口婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白含量研究
本次研究我们采取标准曲线法对16种进口奶粉中的乳铁蛋白进行研究和报告。采用方法为液相色谱法与电泳法相结合。并以4-参数法绘制标准曲线。
在检测过程中，我们在本次实验过程中，发现不同品牌的奶粉乳铁蛋白含量具有较大的区别，即使在同一种产品中，同样存在不同的乳铁蛋白含量，因此国家要加大对进口奶粉的监管，要求奶粉罐体必须进行产品的标注才能上市销售，并且含量的标注必须要真实。一般稀释倍数为400～600倍，将最终标注在产品的曲线范围内，若不在范围内，将其再次调试后再进行测试。本地实验所采取的方法使常用的方法，由于酶联免疫法具有操作简单、敏感性高、测试效果好等特点，但是对于操作人员的技术能力具有较高的要求。另外，在婴幼儿奶粉的测试过程中，由于测试影响因素较多，要正确测试奶粉中乳铁蛋白的含量，还要正确配置浓度，采用相应的标准对照，测试过程要及时记录数据，对进口奶粉做出最客观的评价。其主要原理是借助了乳铁蛋白在非酸性条件下受热或导致失活，通過测试过程中乳铁蛋白的变化。当然，婴幼儿对于乳铁蛋白的需求会随着年龄的增长而减少，因此要进口不同种类的奶粉产品，并且制定有关的规定。我国对婴幼儿阶段奶粉中营养成分的含量规定为不得低于80%。这要求相关部门加强对进口奶粉的管理，尤其是对其中主要成分乳铁蛋白含量的测试，营养成分符合才能进口。乳铁蛋白是婴幼儿奶粉中必备的元素，由于民众信任这一点，因此近年来成为主要的卖点。一般进口奶粉将含有乳铁蛋白的婴幼儿奶粉视为高级产品，价格较高。但在这一过程中，很多产品借助这一特征打虚假广告。购买此类产品不仅浪费钱财，而且对婴儿的健康造成影响，对现代人而言，要正确认识婴幼儿奶粉的营养成分，对相关部门而言，要进一步的进行检测。
5 总结
乳铁蛋白是奶粉中的主要成分，是奶粉的强化剂之一。在购买过程中，很容易按照乳铁蛋白来判断产品的优劣。但在这一过程中，很多顾客并不能清楚的认识这一点，盲目的购买国外产品。不仅造成经济损失，所购买的产品质量较低。因此，笔者通过具体的实验方式来检验婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的含量，使民众能够了解奶粉中乳铁蛋白的真正含量，从而正确选择奶粉，确保婴儿的应用安全。正确测试乳铁蛋白并将之公之于众是保证我国公民权利和安全的主要手段。因此我们对16种在销的并且是购买量较大的进口婴儿奶粉进行了检测。检测结果显示，部分进口奶粉中的乳铁蛋白含量并不在规定范围之内，我国目前对于进口奶粉的检测相对严格，但国际上对乳铁蛋白含量的要求与我国要求有一定的差别，这就要求我国进一步明确食品中，婴幼儿奶粉中乳铁蛋白的含量要求，并且增加科研力量，对中国婴儿营养成分需求进行试验和剖析，并将其公布，要求进口奶粉必须标注乳铁蛋白含量，满足国人需求。
参考文献
[1]聂炎炎，刘冬虹，吴环等.婴幼儿配方奶粉中生物素含量的快速微生物检测方法研究[J].检验检疫学刊，2014，（06）.
[2]杜凌，任璐，苏米亚.婴儿奶粉中乳铁蛋白的检测方法的研究[J].乳业科学与技术，2008，（3）.
[3]贾云虹，宋晓青，杨凯等.高效液相色谱法测定婴儿配方奶粉中乳铁蛋白含量[J].中国奶牛，2015，（13）.