UPLC—MS/MS研究披针灰叶素B在不同种属肝微粒体中的代谢稳定性及代谢酶表型
材料
Waters AcquityTM超高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪(UPLC-MS),包括PDA紫外检测系统(PDA detector)、二元泵溶剂系统(Waters Binary Sol-vent Manager)、进样系统(Waters Sample Manager)、电喷雾离子源(ESI)接口、Quattro PremierXE三重四级杆质谱仪、MassLvnx V4.1数据采集与处理软件(美国Waters公司):Thermo Heraeus Fresco 17低温冷冻离心机(Thermo Scientific公司);230V-UK涡旋混合器(Labnet International公司):BT 125D电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司):Milli-Q超纯水系统(美国Merck Millipore公司)。
披针灰叶素B为四川大学生物治疗国家重点实验室从崖豆藤属植物孟连崖豆M.griffithii的藤茎中分离而得,经UV,1H和13CNMR,HMBC,HMQC谱学分析鉴定其结构,并经RP-HPLC测定,用峰面积归一化法计算其纯度为99.94%:刺芒柄花素对照品(内标,批号01112916)购于INDOFINE chemi-cal公司:奎尼丁(quinidine,QND)购于TCI上海化成工业发展有限公司:α-萘黄酮(alpha-naphthofla-vone,ANF)购于东京化成工业株式会社:二乙基二硫代氨基甲酸钠(sodium diethvldithiocarbamatre,DDTC)、磺胺苯吡唑(sulphaphenazolum,SPP)均购于美国Sigma公司;盐酸噻氯匹定(ticlopidine hydro-chloride,TCP)、毛果芸香碱(pilocarpine,PCP)购于中国食品药品检定研究院;酮康唑(ketoconazole,KCZ)购于德国Dr Ehrenstorfer公司:SD大鼠、人、比格犬、猴肝微粒体(20 g·L-1)及NADPH发生系统均购自武汉普莱特生物医药技术有限公司,并于-80℃冻存:甲醇为色谱纯(美国Fisher公司):水为Milli-Q超纯水。
2方法
2.1对照品溶液的配制