外源IBA对裸花紫珠插穗营养物质含量及抗氧化酶活性的影响
材料，使用吲哚丁酸（IBA，1 500 mg/L）处理插穗，以清水为对照，每隔6 d取样1次，测定生根过程中插穗基部可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白含量及吲哚乙酸氧化酶（IAAO）、多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）活性的动态变化。结果表明，扦插后0～12 d，1 500 mg/L IBA处理增加了插穗内可溶性蛋白含量，降低了淀粉含量，可溶性糖含量先降后升，IAAO、POD、PPO活性增加；扦插后12～30 d，淀粉及可溶性糖含量逐渐降低，可溶性蛋白含量先升后降，但仍都高于对照，IAAO和PPO活性逐渐下降，POD活性先降后增；扦插30 d后，可溶性糖、蛋白、淀粉含量逐步趋于稳定，IAAO活性趋于稳定，而PPO和POD活性逐渐降低。总之，较高浓度的可溶性糖、可溶性蛋白，低浓度的淀粉，较高的IAAO、POD和PPO活性有利于裸花紫珠插穗不定根形成和发育。
关键词 扦插繁殖；营养物质；抗氧化酶活性；IBA处理
中图分类号 S567 文献标识码 A
裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.）为马鞭草科（Verbenaceae）紫珠属（Callicarpa）植物，国内主要分布在福建、广东、广西、海南等省区[1]。全株可入药，具有抗菌、止血、消炎、解毒、收敛等功效，药用价值高、应用范围广[2]。近年来，种植面积不断扩大，对苗木的需求不断增大。由于裸花紫珠采种期短且种子不宜储藏、发芽率较低的缘故[3]，扦插繁殖成为主要的繁殖手段。
外源激素类物质被广泛用于植物的扦插繁殖，特别是IAA和IBA，对不定根的诱导和发生起调控作用[4-5]。一些研究表明，扦插生根过程中，插穗内的营养物质含量及抗氧化酶活性与不定根形成密切相关。茅林春等[6]研究发现，经IBA处理后的梅（Prunus mume Sieb）插穗在不定根发生和生长过程中，可溶性糖含量和生根率呈显著的正相关，而淀粉含量和生根率呈显著的负相关。赵云龙等[7]对糙叶杜鹃（Rhododendron scabrifoliu）扦插研究发现，外源激素可显著的促进插穗内可溶性糖的增加，有利于插穗不定根的形成。外源激素类物质对插穗内过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）和吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性产生显著影响[8-10]。魏海蓉等[11]对甜樱桃（Prunus avium）矮化砧‘吉塞拉 6号’研究发现，外源IBA处理能够提高生根率，其主要原因是提高了PPO、POD活性，降低了IAAO活性。
外源IBA处理可显著提高裸花紫珠扦插生根率[12]。 周再知等[13]采用4种IBA浓度处理裸花紫珠插穗，确定了1 500 mg/L IBA浓度下生根效果最佳，揭示了此浓度下，插穗内源激素IAA、ABA、GA和ZR含量随生根进程的变化规律。对扦插过程中，插穗营养物质含量和相关氧化酶活性的变化规律尚不明确。本研究的目的是探究外源IBA（1 500 mg/L）处理下，裸花紫珠扦插生根过程中，插穗的可溶性糖、淀粉及可溶性蛋白含量以及POD、PPO和IAAO活性的变化规律，进一步揭示其不定根的形成机理，为裸花紫珠的扦插繁殖提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
从海南五指山采集野生裸花紫珠的种子，播种育苗。2年生时，选用生长健壮、无病虫害的当年生半木质化枝条。截取中部，制成长度9～11 cm，具2～3个芽眼，上端为平口、保留两侧半片叶，下端斜切接近马蹄形的插穗。
1.2 方法
1.2.1 试验设计 采用单因素完全随机区组设计，设置2个IBA浓度（0和1 500 mg/L）处理，每个区组重复3次，每处理小区插穗100条。以泥炭 ∶ 蛭石 ∶ 河沙=2 ∶ 1 ∶ 1的体积比配置混合扦插基质。扦插前2 d，将其装入长540 mm×宽280 mm×深110 mm规格50穴苗盘内，并用0.5%的高锰酸钾进行淋灌消毒。将制备好的插穗每50条扎成1捆，用质量百分比为0.1%的高锰酸钾溶液消毒1～2 min，取出用蒸馏水冲洗干净。在IBA不同处理浓度溶液及清水中速蘸15 s，而后竖直插于上述穴盘中，深度3～4 cm。扦插后，浇水、覆盖薄膜，每隔3 d交替喷洒质量百分比为0.1%的高锰酸钾溶液和50%多菌灵可湿性粉剂500倍液消毒。20 d以后，仍按此浓度交替消毒，7 d 1次。保持扦插环境温度在21～33 ℃之间，相对湿度在70%以上。
1.2.2 测定项目与方法 扦插后，每隔6 d，取样1次，总共取样8次。每个重复随机抽取10～12条插穗，迅速用蒸馏水将基部冲洗干净，滤纸擦干，然后置于冰盒内，带回实验室。迅速剥取穗条基部2～3 cm韧皮部，剪碎、混匀，经过液氮冷冻处理后，保存于-20 ℃的超低温冰箱中。采用蒽酮比色法测定可溶性糖和淀粉含量；考马斯亮蓝G-250染色法测定可溶性蛋白含量；吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性和过氧化物酶（POD）活性的测定，参照植物生理学实验指导[14]；采用邻苯二酚比色法测定多酚氧化酶（PPO）活性，参照植物生理学实验技术[15]。各测定项目材料均以鲜重（FW）计量。
2 结果与分析
2.1 裸花紫珠插穗生根过程中营养物质含量的变化
2.1.1 可溶性糖含量的变化 图1表明，IBA（1 500 mg/L）处理下插穗基部可溶性糖含量，呈现出“下降-上升-下降”的趋势。扦插后逐渐下降，第6天时降到谷值，降幅34.1%，6～12 d快速上升，12～18 d上升速度减缓，在第18天时达到峰值，增幅为40.7%。对照在扦插第6天后，插穗的可溶性糖含量持续下降，第12天时达到谷值，12～18 d上升较为缓慢，18～24 d上升速度加快，第24天时，达到峰值，增幅为41.0%。峰值之后，IBA处理的可溶性糖含量持续下降，第30天后，趋于平稳，而对照处理则延迟到第36天以后。第42天时，两者的可溶性糖含量均维持在40.0 mg/g（以鲜重计，以下类同）左右。