坐骨神经-腓肠肌标本制作的改进
摘要:传统方法制作坐骨神经-腓肠肌标本,比较费时费力,标本质量也不算很高,时常产生制作不成功的的标本,失去了肌肉收缩的兴奋性,不能用于肌肉收缩实验。改进后的标本制作方法,制作方法相对简单,易于掌握,缩短了标本制作的时间,从而提高了制作的标本质量。
关健词:坐骨神经 腓肠肌 标本制作 改进
坐骨神经-腓肠肌标本的制作是生理学实验中必须掌握的一项基本技术。常用蟾蜍或蛙的坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋与兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生命现象和过程。蛙类的一些基本生命活动规律与温血动物相似,而维持其离体组织正常活动所需的理化条件比较简单,易于建立和控制。但是,按照传统方法制作坐骨神经-腓肠肌标本,比较费时费力,标本质量也不算很高,时常有制作不成功的的标本,不能用于肌肉收缩实验。改进后的标本制作方法,节省了标本制作的时间,提高了制作的标本质量。
1 传统坐骨神经-腓肠肌标本的制作的方法
1.1破坏脑和脊髓
取蟾蜍或蛙一只,用探针捣毁脑组织和脊髓。
1.2 剪除躯干上部及内脏
在骶骼关节水平以上1～2cm处剪断脊柱,再沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部,留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于脊柱两侧的坐骨神经。
1.3 剥皮
剥掉全部后肢的皮肤,把标本放在盛有任氏液的培养皿中。洗净剪刀、镊子等全部手术器械。
1.4 分离两腿
用镊子夹住脊柱标本提起,背面朝上,剪去向上突起的尾骨,沿正中线用剪刀将脊柱和耻骨联合中央劈开两侧大腿,并完全分离,将两条腿浸入盛有任氏液的培养皿中。
1.5 游离坐骨神经
用玻璃分针沿脊柱旁游离坐骨神经,剪去椎旁骨肉,保留二、三个椎体与神经相连。再将梨状肌及其附近的结缔组织剪去。循坐骨神经沟(股二头肌与半膜肌之间的裂缝处),找出坐骨神经的大腿段。剪断坐骨神经的所有分支,并将神经一直游离至腘窝。
1.6 完成坐骨神经小腿标本
将游离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上,在膝关节周围剪掉全部大腿肌肉,并用普通剪刀将股骨刮干净。然后从股骨中部剪去上段股骨,保留的部分就是坐骨神经小腿标本。
1.7完成坐骨神经腓肠肌标本
将坐骨神经小腿标本在跟腱处穿线结扎后,于结扎处远端剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节处,然后从膝关节处将小腿其余部分剪掉,这样就制得一个具有附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的标本。
2 改进的坐骨神经-腓肠肌标本的制作的方法
(1)击晕蟾蜍或蛙再破坏脊髓。用骨剪击蟾蜍或蛙的头部,再用探针捣毁脊髓。改变了用探针捣毁脑的做法,可减少动物痛苦,体现动物福利保护。(2)解剖体腔。沿腹壁正中线由后向前剪开体腔,再在肩带和腰带处转向左右剪,作横切。用镊子掀开内脏,暴露出体腔下部脊柱两侧的坐骨神经。(3)游离坐骨神经。用玻璃分针沿脊柱旁游离坐骨神经,剪断坐骨神经的所有分支,近脊柱处剪断坐骨神经。(4)剥皮。大腿上部皮肤先作环割,然后剥掉全部后肢的皮肤。(5)抽出坐骨神经。将标本背面朝上放置,把梨状肌及其附近的结缔组织剪去。在股二头肌与半膜肌之间找出坐骨神经的大腿段。用玻璃分针仔细剥离,然后把坐骨神经从体腔中抽出,剪断坐骨神经的所有分支,并将神经一直游离至腘窝。(6)完成坐骨神经腓肠肌标本。剪掉全部大腿肌肉,并将股骨刮干净,从股骨中部剪去上段股骨。然后在小腿腓肠肌跟腱处穿线结扎后,于结扎处远端剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节处,然后从膝关节处将小腿其余部分剪掉,这样就制得一个具有附着在股骨上的腓肠肌并带有支配腓肠肌的坐骨神经的完整标本。
3 与传统方法比较
从制作步骤上看,改进后的方法只比传统方法减少了一个步骤。实际上,改进后的方法比传统方法节省了至少三分之一的时间。主要体现在,没有剪除躯干上部及内脏的步骤。没有分离两腿的步骤,用不着剪去尾骨,以及沿正中线剪开脊柱和耻骨联合中央来分离两腿。剪断股骨自然两腿就分开,并且剪断股骨和剪断小腿也是同时进行的。另外,在枕骨大孔处用探针刺入颅腔,左右搅动充分捣毁脑组织这个过程也省略了。游离坐骨神经和抽出坐骨神经所用的时间也很短。由此可以看出,改进后的方法确实能节省制作标本的时间。本院08级体育系的《运动生理学实验》中的“坐骨神经-腓肠肌标本制作及肌肉收缩实验”课上,本人采用了此方法,节省了制作标本的时间,为后面的肌肉收缩实验腾出了较充裕的时间。
4 与其它方法比较
有关坐骨神经-腓肠肌标本的制作方法的改进,已有许多人提出了不同的改进方法。高志国和乔一枝[1]的方法是一种在体的坐骨神经腓肠肌制作方法,制作出来的标本没有与蛙体分离,只是把腓肠肌游离出来,坐骨神经没有离体,坐骨神经不便于与电极连接。路玉兰[2]的方法,只是把传统方法的步骤顺序改变了一下,即先游离腓肠肌,再分离坐骨神经。步骤并没有减少,只是合并操作剪断脊椎骨和股骨之间多余的部分,以及膝关节以下多余的部分,节省的时间并不多。华田苗、刘再群[3]采用的是“后离体法”。采用活体蛙,先游离出腓肠肌,再分离出坐骨神经,然后捣毁脑和脊髓。剪断颈椎部脊柱,寻找发出坐骨神经的脊椎骨并剪下,游离出坐骨神经,剪断股骨和腓肠肌肌腱。此法比传统方法还多出操作步骤,即要剪断颈椎部的脊柱,还要剪下发出坐骨神经的脊柱。没有节省时间,操作比传统的方法还要繁杂一些。优点是单收缩幅度增大,标本脱离体循环时间较短。缺点主要是增加了动物的痛苦,采用的是活体蛙来游离腓肠肌和坐骨神经,没有体现动物福利保护。
5 改进实验的意义
传统方法制作的标本,往往产生制作不成功的标本,失去了肌肉收缩的兴奋性,不能为后续的肌肉收缩实验提供标本,根据以往的经验,每次都会产生个别的不成功现象。而改进后的制作方法,首先体现了对动物的保护,减少动物痛苦。其次是制作方法相对简单,易于掌握。速度和质量相辅相成,使得制备标本的时程缩短,减少标本的暴露时间,提高了标本质量的保险系数,制作的标本质量较高,制作过程中产生的不成功标本极少,为后续的肌肉收缩实验奠定了基础。
参考文献
[1] 高志国,乔一枝.腓肠肌标本制备的简易方法[J].生物学通报,2002,37(4):42.
[2] 路玉兰.制备坐骨神经-腓肠肌标本方法的改进[J].廊坊师范学院学报,2001,17(4):96-97.
[3] 华田苗,刘再群.蛙坐骨神经-腓肠肌标本制备方法的改进[J].安徽师范大学学报(自然科学版),2001,24(1):71-72.
[4] 解景田,谢申玲.生理学实验[M].北京:高等教育出版社,1997.
[5] 邓树勋,王健,乔德才.运动生理学[M].北京:高等教育出版社,2006.