探究肿瘤靶向物载体的细胞靶向性
[摘要] 目的 探讨和分析肿瘤靶向物载体的细胞靶向性。方法 选择293T细胞和H460细胞作为实验标本，实验地点选择该院实验室，时间为2016年2—3月，选择合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超滤离心管、荧光分子异硫氰酸荧光素等，并总结和探讨肿瘤靶向性药物所具有的细胞靶向性。 结果 在常规药物制剂的条件下对抗肿瘤药物新型靶向载体系统进行发展，并且改善药物在载体内部的代谢动力学相关特征，能够让药物向富集到肿瘤药部位、肿瘤细胞内部聚集，保证疗效得到提升，毒副作用逐渐减小，检测浓度范围之内细胞存活率超过80%，其中G4-Ac毒性为90%、G4-Ac-FITC为87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52细胞毒性为97%，差异具有统计学意义（P<0.05）。 结论 在科学技术不断发展和进步的影响下，抗癌药物剂型的研究工作开始朝着靶向、高效、智能化方向发展，理想药物剂型具有控释、缓释、靶向发展前景较为广阔，值得在；临床运用上进行使用和推广。
[关键词] 肿瘤靶向药物；载体；细胞靶向
[中图分类号] R73 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2016）08（c）-0043-03
To Explore the Cell Targeting Tumor Targeting Drug Carrier
HU Jun
Department of Oncology， Nanjing Red Cross Hospital， Jiangsu Province ， Nanjing，Jiangsu Province， 210001 China
[Abstract] Objective To investigate and analyze the cell targeting of tumor targeting vector. Methods Source selection to 293T cells and H460 cells as experimental samples， experimental sites were selected in the laboratory of our hospital for February 2016 to 2016 March， SP5 52， doxorubicin， the 4th generation of polyamide amine， ultra filtration centrifuge tube， fluorescence isothiocyanate fluorescein， and summarize and discuss the tumor target to drugs with cell targeting. Results Uunder the conditions of conventional pharmaceutical formulations against tumor new drug target to support system development， and improve the drug in the carrier of metabolic dynamics characteristics， can make the drug to eiched to drug site of tumors and tumor cells aggregation， ensure curative effect to improve， toxic side effect decreases gradually， detection concentration range cell survival rate of over 80%， which G4 - Ac toxicity is 90%， G4 - Ac - FITC as 87%， and G4 - Ac - FITC - SP5 52 cytotoxicity was 97%； the difference is statistically significant（P < 0.05）. Conclusion Under the influence of the continuous development of science and technology and progress， form of anticancer drugs work started towards the target， efficient， intelligent direction， ideal of pharmaceutical dosage forms with controlled and sustained release， targeted development prospect is broad， it is in； clinical application of use and promotion.
[Key words] Tumor targeting drug； Vector； Cell targeting
很多治疗以及诊断肿瘤的药物在临床上的运用较为普遍，这些药物所产生的作用具有显著的非选择性特征，体内分布相对较广，一些正常组织器官有着较多的分布在，治疗剂量下对于正常组织器官的毒副作用较为明显，患者无法耐受，从而导致质量效果受到影响[1]。如何提升抗肿瘤药物治疗效果，首先要能够保证药物的肿瘤选择性得到提升，降低在非靶部位出现聚集的现象，减少药物对非靶部位产生的毒副作用，在降低药物治疗剂量的同时减少不必要的给药次数，提升药物效果[2]。选择不同的化疗药物还会对脏体造成不同的损伤，所以对肿瘤靶向药物载体进行研究逐渐成为肿瘤治疗领域需要研究的一个问题。对于肿瘤出现全新的血管，伴随一些蛋白特质表达、高表达的显著特征。研究工作人员开发较多的特异靶向肿瘤新生血管的靶向多肽，包括LHRH、NCR以及RCD肽。为了进一步探讨和分析肿瘤靶向物载体的细胞靶向性，该文把丁二酸酐当成手臂把SP5-52多肽共价转变成聚酰胺—胺形状树枝状高分子材料之上，并利用荧光分子异硫氰酸荧光素当成检测探针，通过对荧光显微镜进行倒置来对肿瘤细胞对药物和载体的吸收状况进行观察和分析，实验时间为2016年2—3月，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择293T细胞和H460细胞作为实验标本，，实验地点选择该院实验室，选择合成的SP5-52、阿霉素、第4代聚酰胺—胺、超滤离心管、荧光分子异硫氰酸荧光素等；所使用的仪器包括紫外可见分光光度计721/721-100型、流式细胞仪贝克曼型、二氧化碳培养箱BPN-50CH（uv）型。
1.2 方法
首先进行靶向载体的合成以及鉴定，需要对PAMAM利用部分乙酰化来减少材料的毒性，保证生物相容性得到提升，并把荧光探针分子FITC共价和载体进行连接，把SP5-52肽利用丁二酸酐手臂共价和载体进行连接，获得相应产物[3]。所有反应步骤的产物都利用氢核磁共振波谱法进行鉴定，并对粒径进行检测。
其次，对冻存的H460细胞和293T细胞进行复苏，并使用具有10%的新生胎牛血清RPM11640P培养液、在含有5%的二氧化碳培养箱中进行培养，控制温度37℃恒温，将显微镜倒置来对细胞生长状态进行逐日观察，当细胞生长超过孔的90%左右时，需要键入1ml的消化液进行消化，并以1：5的比例进行传代。
再者，利用MTT实验对材料细胞的毒性进行检测，并以293T细胞种植在96孔板中，放置在含有5%的二氧化碳培养箱中进行培养，控制温度37℃恒温，选择酶联免疫检测仪对570 nm波长进行检测，检测指标包括各个孔的吸光度，利用细胞存活率对细胞毒性结果进行评价[4]。
还要通过流式细胞术对载体靶向性能进行评价，利用24孔板对293T、H460细胞进行24培养之后放弃原培养液，并在细胞内部加入含有5%浓度的G4-Ac-FITC的培养液200 μL，在37℃环境中进行4 h的培养，并将培养液倒出，对PBS进行2次清洗之后加入胰酶消化液，控制细胞悬液选择1 000 r/min 的离心8 min，加入800 μPBS悬浮细胞，并利用流式细胞仪进行检测。
最后进行细胞摄取实验，利用96孔板对H460进行24 h培养之后丢弃原来的培养液，并向细胞中加入含有游离的DOX200μL培养液。保证培养液的中含有的阿霉素最终浓度控制为10 μmol/L，并继续进行4 h的培养，丢弃之前的培养液，使用PBS进行3次缓冲液进行清洗，对荧光显微镜进行倒置，控制为543 nm激发光下观察细胞可能对阿霉素吸收的情况造成的影响[5]。
1.3 统计方法
该文相关信息和数据使用SPSS 18.0统计学软件进行比较和分析，计量资料使用均数±标准差（x±s）表示，组内多重比较使用t检验，当P<0.05时，为差异具有统计学意义。
2 结果
通过乙酰化修饰的靶向载体将会对非小细胞肺癌细胞产生显著的靶向性，游离状态的SP5-52多肽能够更好地对载体靶向性产生抑制作用，这种靶向载体能够利用物理包埋的方式来影响阿霉素，并且会对阿霉素的释放造成缓释放影响，利用倒置的荧光显微镜来进行观察之后发现靶向载体能够让阿霉素更快速地进入到肿瘤细胞。检测浓度范围之内细胞存活率超过80%。但是，FITC以及SP5多肽链接将会对细胞毒性不造成任何影响，见表1。
3 讨论
在对肿瘤药物靶向载体进行研究时，靶向剂所具有的靶向性将会对载体的靶向性能造成影响，能是否对肿瘤产生靶向作用[6]。目前研究较为普遍的是适配子、单克隆抗体、多肽和配体。多肽则是因为结构简单，所以利用化学合成的方法快读进行合成，和单克隆抗体相比较，其结构较为稳定，不会出现变性，所以，受到较多的关注[7]。
该文实验结果表明实验在1 、2 、3 h和4 h内的四种不同材料产生的毒性作用不同，这就说明时间长短将会对肿瘤靶向性药物效果造成不同的影响。其中其中G4-Ac毒性为90%、G4-Ac-FITC为87%、而G4-Ac-FITC-SP5-52细胞毒性为97%。受体—配体介导的NLC属于发展前景较好的主动TCS，其选择的材料具有生物相容性良好、无毒安全的特征，其机体耐受性较为显著，稳定剂满足通用安全标准的表面活性要求，通过使用高压乳均匀法进行制备，该种方法相对成熟，得到的粒径相对较小、分布相对狭窄，能够更好地避免对人体造成有害附加剂、有机溶剂的使用，特别是运用在热量条件下性能不稳定的药物中能够产生更加显著的效果[8]。根据高勇等[6]进行的分析，充分表明塑料试管中加入悬浮状的HUVEC细胞为0.5 mL、0～10 pg/tube的RGD0.1 mg，其反应体积为0.7 mL。这和该文研究存在一定的相似性，该文主要是测量不同药物材料不同时间内的效果，但是，其得出的测量结果存在差异。另一种措施就是针对PAMAM表层部分进行乙酰化修饰，屏蔽部分正电荷，从根本上降低表层正电荷密度，减少细胞毒性[9]。
总之，G4-FITC-SP5-52体外展示出肿瘤所具有的良好性能，并逐渐转变成了肿瘤临床治疗过程中的主要靶向药物载体。
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（收稿日期：2016-05-25）