呕吐毒素对未成熟小母猪胃肠道的经口毒性研究
)r-H<@NJdMii_vH?wky"http://www.xcysycw.com/k/duizhao/" target="_blank" class="keylink">对照组（21头）和试验组（18头）两个处理组。试验组小母猪按每天每千克体重口服12 μg呕吐毒素，连续服用42 d。呕吐毒素分析样本在每天早饲喂前以胶囊形式服用；对照组猪在与试验组猪相同的时间内口服安慰剂（不含呕吐毒素的胶囊）。呕吐毒素的饲喂量依体重决定，每周进行调整。在试验的第1、7、14、21、28、35和42天，试验组和对照组各选取3头猪进行扑杀（即每次共扑杀6头），但第1天仅扑杀3头对照组小母猪。每周收集扑杀小母猪的胃肠道组织（肝左叶、十二指肠第一段与十二指肠中段、空肠中段、升结肠中段、降结肠中段）样本。
2.3 化学药品
呕吐毒素标准品和有机溶剂（HPLC级）购自德国Sigma公司。所有用于提取和纯化呕吐毒素的化学试剂均购自波兰POCh公司。HPLC流动相用水经Milli-Q纯水系统（USA）纯化。
2.4 组织样本
以下组织样本的处理：十二指肠、空肠、回肠、盲肠、升结肠、横结肠、降结肠和肝脏经磷酸盐缓冲液清洗后收集。纯组织在研磨和提取前于-80 ℃下冻存、备用。
2.5 提取和纯化
组织样本（2 g）用甲醇匀浆2次，随后4 000 rpm离心，甲醇自然蒸发。根据操作说明，剩余物经20 mL水和20 mL 0.2 M 乙酸钠稀释后加入免疫亲和柱的顶部，以乙腈-水混合液洗脱（乙腈∶水=82∶12）。洗脱液在40 ℃时于氮气流下完全蒸发，干燥残留物于-20 ℃下储存，待HPLC分析。
2.6 呕吐毒素HPLC分析
呕吐毒素（λmax=224 nm）色谱分析系统由配备Waters 2996型光电二极管阵列检测器的Waters 2659型高效液相色谱系统和Nova Pak C-18柱（300 mm× 3.9 mm）系统组成。根据相关校准曲线，通过测定保留时间点上的峰面积，对呕吐毒素进行定量。呕吐毒素的检测极限为0.001 μg/g。
2.7 统计分析
各组织样本中的呕吐毒素含量采用SPSS统计分析方法中的Tukey-test法进行差异显著性分析。结果以平均数和标准差表示。
3 结论
口服呕吐毒素7 d后（第Ⅰ试验期），只有在肝脏中能够检测到该毒素。小肠组织中呕吐毒素含量递减顺序为回肠>十二指肠>空肠，大肠和肝脏组织中呕吐毒素的浓度递减顺序为盲肠>升结肠>肝脏>降结肠>横结肠。最大的残留系数可达到如下水平：回肠（小肠组织）为0.037（第Ⅵ试验期）、升结肠（大肠组织）为0.049（第Ⅴ试验期）、盲肠（大肠组织）为0.046（第Ⅵ试验期）和肝脏为0.081（第Ⅰ试验期）。总之，这些结果表明，呕吐毒素的口服剂量和时间会影响其在小母猪胃肠道内的分布。