小檗碱对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF—β1/SnoN表达失衡及其Smad信号通路的调控作用

材料

1.1 动物 SD雄性大鼠，体重200～250 g，安徽医科大学实验动物中心提供，动物合格证号SCXK（皖）2005-001。

1.2 药物和试剂 小檗碱购于宁波德康生物制品有限公司（批号20090512），用前以0.5%羧甲基纤维素钠（0.5%CMC-Na）配制混悬液；依那普利购于济南利民制药有限公司（批号1001121），用前研磨，以0.5%CMC-Na配制成混悬液；STZ购于Sigma公司（批号S-0130）；CMC-Na购于湖南尔康制药有限公司（批号20090701）；枸橼酸（批号20080601）和枸橼酸钠（批号20091203）购于台山市新宁制药有限公司；葡萄糖测定试剂盒（批号EH578）和尿素氮测定试剂盒（批号EG963）购于日本和光纯药工业株式会社；肌酐液体试剂盒（批号60971014/1）和尿液总蛋白液体试剂盒（批号60065769）购于德赛诊断系统（上海）有限公司；尿微量白蛋白液体试剂盒购于潍坊三维生物工程集团有限公司（批号110201）；兔抗大鼠SnoN多克隆抗体购于Abcam公司（批号ab78797）；兔抗大鼠TGF-β1多克隆抗体（批号BS-0103R）、兔抗大鼠Smad2/3多克隆抗体（批号BS-0718R）和兔抗大鼠Smad7多克隆抗体（批号BS-0566R）购于武汉博士德生物工程有限公司；通用型SP 免疫组化染色试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司（批号HK3400805）；Trizol购于美国Invitrogen公司（批号51512101）；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）试剂盒（批号00066575）和MARKER（批号00063264）购于MBI Fermentas公司；引物合成（上海生工生物工程技术服务有限公司）。

1.3 仪器 7600型全自动生化分析仪（日本日立）；LKB-NOVA型超薄切片机（瑞典LKB）； BX51F32H01型光学显微镜（日本Olympus）；170-9703型PCR扩增仪（美国Bio-Rad）；DYY-8C 型电泳仪（北京六一仪器厂）；Tanon GIS-2016 凝胶图像处理系统（上海天能科技有限公司）。

2 方法

2.1 动物模型复制、分组及给药 大鼠适应性饲养1周后，参照文献方法^[9]禁食不禁水12 h，于左下腹一次性注射STZ 50 mg·kg^-1（临用前溶解于0.1 mol·L^-1枸橼酸缓冲液，pH 4.4），72 h后大鼠尾端采血，用血糖仪测定空腹血糖（fasting blood glucose，FBG），选择FBG为13.8～30 mmol·L^-1者进行试验。模型大鼠70只，随机分为5组：模型组、BBR低、中、高剂量组（50，100，200 mg·kg^-1）、依那普利组（1 mg·kg^-1），每组14只，另设正常对照组10只，共6组。动物除模型组及对照组ig给予0.5%CMC-Na，其余各组ig给予相应药物，每天1次，连续给药5周。实验过程中死亡动物剔除，不予统计。

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